pcr電泳條帶圖分析
鐔貝18372267777咨詢： 求助PCR產(chǎn)物條帶分析 -
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______ 看溴酚藍(lán)的位置在很上面,說(shuō)明條帶分子量很小,電泳電壓低,導(dǎo)致樣品彌散,條帶我懷疑是引物二聚體,而非目的條帶.建議先跑touchdown,確定引物能夠跑出來(lái),再慢慢摸索具體的溫度.
鐔貝18372267777咨詢： 關(guān)于瓊脂糖凝膠電泳圖片分析
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______ 條帶分開(kāi)的程度看你實(shí)驗(yàn)的需求.如果你的Marker相鄰兩個(gè)條帶相差100bp,而你的樣本陽(yáng)性結(jié)果和多帶一個(gè)內(nèi)含子的假陽(yáng)性結(jié)果只差50bp(比方說(shuō)你在做反轉(zhuǎn)錄PCR實(shí)驗(yàn))那你當(dāng)然需要分清楚一些.否則的話只要看得清楚你的樣本條帶是位于...
鐔貝18372267777咨詢： pcr電泳帶看不清楚
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______ marker沒(méi)有問(wèn)題,肯定是你們的產(chǎn)物有問(wèn)題.你沒(méi)有上傳你的電泳圖,我只能試著幫你分析一下.如果說(shuō)是完全看不到除引物之外的任何條帶,這就是說(shuō)你的PCR反應(yīng)完全失敗,原因就很多了,在引物和模板鏈沒(méi)有問(wèn)題的情況下,你可以試著降低退火溫度,延長(zhǎng)擴(kuò)增時(shí)間,也就是降低PCR反應(yīng)特異性,看看會(huì)不會(huì)得到什么陽(yáng)性結(jié)果.如果你的電泳結(jié)果是一片模糊的條帶,說(shuō)明PCR過(guò)程中非特異性合成非常多,致使出現(xiàn)非常多的大小不一的片段.這時(shí),你應(yīng)該試著提高退火溫度,縮短擴(kuò)增時(shí)間,減少擴(kuò)增循環(huán)次數(shù),即增加PCR反應(yīng)的特異性,再看看結(jié)果是否有所好轉(zhuǎn).
鐔貝18372267777咨詢： 電泳圖譜清晰的關(guān)鍵是什么? -
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______ 不論是DNA、RNA還是蛋白,漂亮的電泳條帶的基礎(chǔ)是樣品質(zhì)量要好. 1. RNA:RNA提取過(guò)程中不發(fā)生降解的話,一般普通的瓊脂糖電泳會(huì)得到3條清晰地條帶,上面兩條比較亮,且第一條是第二條亮度的2倍,第三條比較淡.如果樣品稍有降解...
鐔貝18372267777咨詢： 我想問(wèn)提取DNA,PCR擴(kuò)增,從電泳圖上如何找到目的片段? -
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______ 看你擴(kuò)增的目的了 以及引物配對(duì)產(chǎn)生擴(kuò)增片段的大小 通常跑膠都會(huì)點(diǎn)上MARKER 不同梯度的MARKER條帶代表的片段大小不一樣 你想得到多大的片段 就跟MARKER比對(duì) 在相同片段大小長(zhǎng)度尋找你的目的片段 當(dāng)然找到以后還要進(jìn)一步的驗(yàn)證片段序列是不是你真正得到的 跑膠出來(lái)的只是在片段大小上面做了一個(gè)初步的篩選
鐔貝18372267777咨詢： 半定量pcr如何分析基因拷貝數(shù) -
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______ 電泳后拍照,用圖像分析軟件測(cè)定條帶的亮度,然后與標(biāo)準(zhǔn)參照帶的亮度進(jìn)行比較,推算出待測(cè)帶的拷貝數(shù).
鐔貝18372267777咨詢： PCR后進(jìn)行DNA電泳跑的條帶是一條,但不是我想要的條帶,是怎么回事啊? -
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______ 你的結(jié)果上的“一條帶”位置在哪里?我想你能確定不是目的帶的話,那應(yīng)該結(jié)果顯示的條帶比較靠前,DNA長(zhǎng)度較小. 那很有可能是引物二聚體.出現(xiàn)這個(gè)情況,可能的原因有3: 1.引物本身不對(duì),不是目的DNA擴(kuò)增需要的引物. 2.DNA回收提純的問(wèn)題 3.PCR體系內(nèi)鎂離子濃度問(wèn)題... 建議排查下各項(xiàng).
鐔貝18372267777咨詢： 我做分子實(shí)驗(yàn),PCR以后電泳監(jiān)測(cè)空白對(duì)照居然有亮條帶出現(xiàn),一開(kāi)始以為是污染,可以連續(xù)幾次做都是這種情況 -
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______ 有很多情況啊,像一樓說(shuō)的,引物二聚體也可能,不過(guò)引物二聚體的位置在marker的末端,會(huì)比較模糊,比陽(yáng)性對(duì)照的條帶要粗.你可以截個(gè)圖上來(lái),讓大家看看其他泳道上的帶是什么情況.如果空白對(duì)照的亮帶在別的泳道里也有,就是污染了,做PCR體系用的水很容易被污染,我的引物也有過(guò)污染的時(shí)候,電泳液里也可能留下跑膠時(shí)跑出去的核酸物質(zhì).不知道你P的是質(zhì)粒,菌液,cDNA,還是細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)過(guò)處理的產(chǎn)物.
鐔貝18372267777咨詢： 有人能跟我解讀一下如何看電泳圖嗎?半定量RCR基因擴(kuò)增的電泳圖各個(gè)部分都有什么意義,如何查看成功還是失 -
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______[答案] 電泳圖是肯定要點(diǎn)Marker的,對(duì)照Marker的條帶,看你擴(kuò)增出的條帶的大小,是否跟你預(yù)計(jì)的條帶大小一致,來(lái)判斷你的PCR反應(yīng)是否成功
鐔貝18372267777咨詢： 二次PCR的產(chǎn)物電泳圖觀察,所有樣都不出現(xiàn)條帶,而是彌散狀的,從投拖到尾,求高手分析一下 -
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______ 非特異性擴(kuò)增太多,建議稀釋模板.提高退火溫度,再試試.還有如果一次PCR產(chǎn)物也是如此,建議切膠回收與目的條帶相近處的彌散帶作為二次的模板.
