酶切電泳條帶分析
暢待19127318967咨詢： DNA酶切反應(yīng)不徹底電泳圖譜是怎樣的 -
名山縣齒圓柱回復(fù)：
______ 酶切不徹底的話會(huì)將應(yīng)該是識(shí)別序列的純合子誤認(rèn)為是雜合子,即應(yīng)是兩條帶的,圖譜為三條帶.DNA降解,長(zhǎng)片段變成若干短片段,圖譜上顯示為L(zhǎng)adder樣改變或者涂抹帶.
暢待19127318967咨詢： 基因組酶切后跑電泳甚什么樣的?我是單酶切,只有一個(gè)酶切位點(diǎn).酶切后的基因組怎么處理才能做后續(xù)的PCR? -
名山縣齒圓柱回復(fù)：
______ 酶切后電泳條帶肯定是模糊的,可能有部分亮帶.單酶切的基因組中選取你所需要的目標(biāo)條帶,然后切膠回收,在做PCR. 希望你明白.
暢待19127318967咨詢： 質(zhì)粒酶切得的條帶很淡,怎么改進(jìn)使它變亮些? -
名山縣齒圓柱回復(fù)：
______ 增加酶切質(zhì)粒的量,可以超過(guò)1微克,用4、5微克,同時(shí)增加酶的用量,但不要超過(guò)體系的十分之一 延長(zhǎng)酶切時(shí)間 電泳上樣時(shí)把所有的都點(diǎn)上
暢待19127318967咨詢： 什么是酶切分析,有什么作用啊 -
名山縣齒圓柱回復(fù)：
______ 酶切分析就是用一定的內(nèi)切酶去酶切DNA,然后觀察酶切產(chǎn)物大小,來(lái)確定自己的樣品DNA是否正確的分析方法.
暢待19127318967咨詢： 質(zhì)粒單酶切出現(xiàn)兩條帶 -
名山縣齒圓柱回復(fù)：
______ 可能是質(zhì)粒僅有單酶切的一個(gè)位點(diǎn),部分酶切了,部分沒(méi)有酶切,酶切的是多數(shù),所以產(chǎn)生條帶較大(也就是濃度的不同)~~但是完整的質(zhì)粒和酶切后的質(zhì)粒條帶因?yàn)榻Y(jié)構(gòu)關(guān)系應(yīng)該不會(huì)很近誒!~~~可以看哈是不是電泳的時(shí)間不夠~~!! 若是存在兩個(gè)以上的單酶切位點(diǎn),原則上可以產(chǎn)生多種條帶~~比如有兩個(gè)單酶切位點(diǎn)可以產(chǎn)生:完整的質(zhì)粒,單酶切的一個(gè)位點(diǎn)被切,兩位點(diǎn)被切三種情況;這樣的原則上會(huì)產(chǎn)生四種大小不同的條帶!!酶切位點(diǎn)越多條帶數(shù)應(yīng)該越多才是!~~ 若是多位點(diǎn)的,可能會(huì)是電泳跑得不好,沒(méi)有分出明顯的條帶!~~ 沒(méi)做過(guò)質(zhì)粒酶切電泳,僅是理論上分析的哈!!
暢待19127318967咨詢： 提質(zhì)粒跑電泳條帶上方區(qū)域都亮,酶切后卻條帶清晰是怎么回事?質(zhì)粒沒(méi)提好嗎? -
名山縣齒圓柱回復(fù)：
______ 好著呢,只要酶切結(jié)果清晰,大小正確就行,不用太在意質(zhì)粒跑膠的結(jié)果,那和你提取的手法有關(guān),各種螺旋超螺旋跑不清楚的 其實(shí)實(shí)驗(yàn)做一做,就不需要跑質(zhì)粒了,提質(zhì)粒那么簡(jiǎn)單的事情,一般不會(huì)出問(wèn)題的
暢待19127318967咨詢： 對(duì)于載體的單酶切和雙酶切,膠圖分別會(huì)如何?為什么會(huì)這樣啊?謝謝幫忙回答? -
名山縣齒圓柱回復(fù)：
______ 單酶切一個(gè)電泳道上會(huì)有幾個(gè)比較亮的帶,而且你所根據(jù)基因大小所選擇的條帶內(nèi)也不一定是你要的.原因是單酶切形成的粘性末端完全相同,就像拼圖,除了內(nèi)容不同,兩邊完全切合.所以結(jié)合方式過(guò)多,可能性也多,如質(zhì)粒和目的基因正確連接,質(zhì)粒和目的基因反轉(zhuǎn)連接,質(zhì)粒和質(zhì)粒連接,目的基因與目的基因的連接. 雙酶切一般會(huì)有3條帶,而且正確現(xiàn)象應(yīng)只有一個(gè)是非常亮的.因?yàn)閮煞N酶識(shí)別兩個(gè)位點(diǎn)切開(kāi),無(wú)論是質(zhì)粒還是目的片段兩端的粘性末端完全不同,還是拼圖,內(nèi)容不同,兩端切合口也不同,除了一種連接方式外沒(méi)有其他連接了.膠途中3條帶分別為:目的片段條帶,空質(zhì)粒條帶,最亮的重組質(zhì)粒條帶.
暢待19127318967咨詢： 對(duì)PFGC1008載體進(jìn)行雙酶切,分別為ASCI和BAMHI,然后進(jìn)行電泳切膠回收,但是發(fā)現(xiàn)酶切時(shí)為三條帶? -
名山縣齒圓柱回復(fù)：
______ 可能是酶切效率比較低造成的,質(zhì)粒完全沒(méi)有被切開(kāi)時(shí)為1條帶,部分被切開(kāi)時(shí)有3條帶.需查驗(yàn)一下所使用的試劑和酶切條件參數(shù)是否有問(wèn)題.
暢待19127318967咨詢： 剛活化后 提取的質(zhì)粒(小量試劑盒提取法) 電泳圖為什么會(huì)出現(xiàn)2、3條帶?這是中間載體的質(zhì)粒,馬上要酶切 之后鏈接,之前是因?yàn)闆](méi)有鏈接成功,所以懷... -
名山縣齒圓柱回復(fù)：
______[答案] 這是很正常的,質(zhì)粒提取過(guò)程中或多或少會(huì)對(duì)質(zhì)粒本身造成一定的損傷,根據(jù)損傷的不同,質(zhì)粒通常會(huì)出現(xiàn)三種不同的構(gòu)型... 來(lái)分析其大小,不過(guò)一般都能過(guò)做下一步酶切實(shí)驗(yàn).如果樓主要看質(zhì)粒有沒(méi)有問(wèn)題,那么必須得酶切后跑電泳,酶切后的質(zhì)粒...
暢待19127318967咨詢： 為什么雙酶切產(chǎn)物和連接產(chǎn)物電泳后會(huì)出現(xiàn)多個(gè)條?為什么雙酶切產(chǎn)物和
名山縣齒圓柱回復(fù)：
______ 正常質(zhì)粒是閉合的雙鏈DNA.在電泳過(guò)程中可能使質(zhì)粒發(fā)生開(kāi)環(huán),或者由開(kāi)環(huán)解開(kāi)螺旋變成線形.這三種形態(tài)電泳時(shí)的分離率不同,分離速度不同,分成三帶.閉環(huán)(超螺旋),開(kāi)環(huán),線形的螺旋率依次降低
