電泳前計(jì)(jì)算上樣的dna量
丑富15516869299咨詢： DNA上樣后過了很久才開始電泳會有影響嗎(電泳 -
新絳縣邊回復(fù)：
______ 原因有以下: 1、 可以考慮是不是樣品不純,目的產(chǎn)物與雜帶相差不大,所以要多跑一段時(shí)間才有尾巴.參考marker,marker應(yīng)該不會有.如果有的話說明配膠有問題. 2 、瓊脂糖檢測DNA一般去1~5微升原液,加2微升溴酚藍(lán)便可,注意上樣濃...
丑富15516869299咨詢： 瓊脂糖電泳的一條帶中是否可能含有多余一種類型的DNA片段?為什么? -
新絳縣邊回復(fù)：
______ 有可能1,時(shí)間沒跑夠,沒跑開,一條帶里就有很多種了2,即使跑開了,片段大小差不多的話也有可能是在一條帶上 但是,主要還是看你的上樣的DNA啊,你PCR跑出來的很特異的,一般就是一種類型的
丑富15516869299咨詢： 為何DNA電泳時(shí)條帶很好,但是濃度卻很低? -
新絳縣邊回復(fù)：
______ 儀器測定濃度本身誤差比較大,通常是根據(jù)marker條帶對應(yīng)的濃度來估算目的條帶所對應(yīng)濃度,這種方法更加準(zhǔn)確
丑富15516869299咨詢： 怎樣初步檢測提取的DNA的多少 -
新絳縣邊回復(fù)：
______ 一般DNA Marker的量都是已知的,所以最簡單的方法就是跑電泳,然后和DNA Marker比較就可以.當(dāng)然如果有分光光度計(jì),直接測OD260/280也不是很費(fèi)事.
丑富15516869299咨詢： 怎樣用電泳法測定未知DNA片段的分子量 -
新絳縣邊回復(fù)：
______ 用已知的DNA Marker 和 未知的DNA一起跑電泳,看未知的DNA條帶位置即可. 看它接近于哪一條已知的DNA Marker 條帶,即可判斷大致的DNA分子量.
丑富15516869299咨詢： 怎樣通過電泳圖計(jì)算DNA分子量,擴(kuò)出的基因與marker不相符,無法通過marker確定,是否有計(jì)算方法通過電泳 -
新絳縣邊回復(fù)：
______ 能,以前求過遷移率,最后記得化簡完的結(jié)果是好像是l^2和m成正比,也就是電泳距離的平方和分子量成正比,但也是估算,基本上差不多.或者你可以根據(jù)marker的距離什么的自己推算一下.但如果遇到質(zhì)粒或者超螺旋,結(jié)果差距就比較大了
丑富15516869299咨詢： 質(zhì)粒提取,機(jī)器測得OD260/OD280=2.04,濃度780ug/mL,但是電泳檢測沒有條帶 -
新絳縣邊回復(fù)：
______ 估計(jì)有很多種可能,我簡單說幾種,你看看能不能對上號 一、電泳檢測時(shí)的上樣液濃度太大,導(dǎo)致的DNA無法進(jìn)入膠體中. 1、通常是loading buffer中水分揮發(fā)掉了濃度太大,點(diǎn)樣的時(shí)候會被槍頭帶出來,或者就是濃度大使得DNA無法進(jìn)入瓊...
丑富15516869299咨詢： 細(xì)菌基因組dna電泳所用的Marker多大 -
新絳縣邊回復(fù)：
______ 主要看你怎么做了,如果是采用高分子量DNA提取方法獲得的DNA則一般用50K的λ噬菌體DNA; 如果你是用常規(guī)DNA方法獲得的則20kb左右的λDNA+HindIII就可以了; 如果是脈沖電泳,則可能需要更大的marker.
丑富15516869299咨詢： DNA電泳時(shí),為什么加樣時(shí)DNA樣大量冒出? -
新絳縣邊回復(fù)：
______ 從膠下面冒出,可能是膠沒凝固好或其他問題導(dǎo)致加樣口下面漏了 如果從上面出來,可能孔里氣泡沒排盡,注意用緩沖液充分浸沒排除.另一種可能就是電泳緩沖液的問題,檢查一下,是0.5*的不?如果用高濃度緩沖液可能出現(xiàn)外漏,或者你加的是水?再一種可能注意加樣孔的承載量!比如某些小膠只能跑5ul的,多了就只能外冒了 再一種可能,操作技術(shù)問題
