Sephadex葡聚糖凝膠柱使用注意事項(xiàng)
Sephadex葡聚糖凝膠柱使用及注意事項(xiàng)
1 Sephadex G型葡聚糖凝膠僅適用于水環(huán)境，Sephadex G-25經(jīng)羥丙基化后變?yōu)镾ephadex LH-20，具有分子篩功能，也能在極性與非極性溶劑混合溶液中產(chǎn)生反相層析效果。雖然價(jià)格高昂，但因其出色的性能和可循環(huán)利用性，備受青睞。另外，上樣樣品的損失極小，特別適用于處理小樣品，這也是我們實(shí)驗(yàn)室常用的原因之一。
2 Sephadex LH20的原理。
Sephadex LH20的分離原理主要分為兩部分：以凝膠過濾為主，同時(shí)具備反相分配作用（在反相溶劑中）。通過凝膠過濾作用，大分子化合物保留較弱，先被洗脫，小分子化合物保留較強(qiáng)，后出柱。使用反相溶劑洗脫時(shí)，Sephadex LH20對(duì)化合物產(chǎn)生反相分配作用，極性大的化合物保留較弱，先被洗脫，極性小的化合物保留較強(qiáng)，后出柱。使用正相溶劑洗脫時(shí)，主要依靠凝膠過濾作用來分離。
3 Sephadex LH20洗脫溶劑。
根據(jù)第2點(diǎn)所述，Sephadex LH20的洗脫溶劑分為反相和正相兩種，使用*多的是反相溶劑洗脫，通常采用甲醇-水系統(tǒng)，先用水，逐漸提高甲醇的比例，*后使用100%甲醇沖柱。正相系統(tǒng)通常采用氯仿-甲醇，先使用50%氯仿-甲醇，然后逐漸增加甲醇的比例，*后使用100%甲醇沖柱。
4 Sephadex LH20樣品的處理與洗脫溶劑的選擇。
如果樣品極性較高，應(yīng)選用反相溶劑洗脫（甲醇-水），樣品需使用少量的甲醇-水溶解，并通過過濾濕法上樣。如果樣品極性較低，應(yīng)選用正相溶劑洗脫（氯仿-甲醇），樣品需使用少量的氯仿-甲醇溶解，并通過過濾濕法上樣。
5 Sephadex LH-20的步驟。
(1) 選擇條件：
梯度洗脫在Sephadex使用中并不像在正相柱層析中那么重要。首先，樣品應(yīng)能溶解在盡可能少的洗脫劑中。極性較大的樣品使用甲醇-水系統(tǒng)；極性較小的樣品通常使用不含水的系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)室常用正己烷-二氯甲烷-甲醇系統(tǒng)，使用多年，效果良好。
(2) 飽和層析柱：
使用洗脫劑將凝膠搖勻，直立柱身，讓其自然沉降，避免氣泡。至少半小時(shí)后打開開關(guān)，流出幾個(gè)柱體積的洗脫劑，確保凝膠在正確比例的洗脫劑中。
(3) 樣品處理：使用盡可能少的洗脫劑溶解樣品，常壓過濾。
(4) 濕法上柱。這是需要技巧的步驟。
(5) 洗脫：控制流速，一般1滴/秒以下，可參考廠家參數(shù)；必要時(shí)調(diào)整極性（大多數(shù)情況下，一個(gè)極性即可將樣品洗脫）。
6 分離的技巧，*后談?wù)勎业氖褂眯牡?/p>
(1) 流速不可過快，切忌急躁，欲速則不達(dá)。
(2) 柱子盡可能長，Sephadex LH20柱長增加可極大地改善分離效果，不吝惜填料，寧愿將填料全部裝入一根大柱子中，避免將填料裝成幾根小柱。
(3) 餾分接取要精細(xì)，可取1/10或1/20個(gè)保留體積。
(4) 洗脫體積通常為2-3個(gè)保留體積，對(duì)特別保留強(qiáng)的化合物，可洗脫5個(gè)保留體積。
(5) 鞣質(zhì)成分死吸附嚴(yán)重，若不在乎填料，可用Sephadex LH20分離鞣質(zhì)。
(6) 對(duì)黃酮類成分的分離效果優(yōu)良，方法成熟，有大量文獻(xiàn)參考。
(7) 填料反復(fù)使用，每次使用完畢，一般可用甲醇將柱子洗凈，然后使用下一次分離的起步溶劑替換甲醇，以便再次使用。
Sephadex LH-20是由葡聚糖G-25羥丙基化加工而成，屬于分子篩凝膠，尤其適用于天然產(chǎn)物在有機(jī)溶劑中的純化。例如：類固醇、萜類、脂類以及小分子多肽等，Pharmadex LH-20同時(shí)適用于分子類別非常相似的物質(zhì)的分離和工業(yè)規(guī)模的制備，既可用于初步純化步驟，也可用于*終精制步驟，如非對(duì)映同分異構(gòu)體的分離。
1. 裝柱
形成穩(wěn)定均一的柱床是關(guān)鍵。膠顆粒越均一（粒徑分布越窄），越容易獲得穩(wěn)定均一的柱床。然而，對(duì)于Sephadex LH-20而言，25～100μm的粒徑范圍相對(duì)于許多用于制備色譜的填料而言，粒徑分布相對(duì)較寬。但在溶脹后，膠粒移動(dòng)容易得到均一的柱床。對(duì)于長柱（*高達(dá)250cm），同樣適用。裝柱前，層析柱和儲(chǔ)槽都必須徹底清洗。
Sephadex LH-20在使用前必須溶脹。溶脹過程中盡量避免過度攪拌，以防止破壞球形膠粒，且避免使用磁力攪拌器。
在室溫下，將凝膠溶脹于層析溶劑中至少三小時(shí)，溶脹后膠體積的大小取決于使用的溶劑系統(tǒng)，請(qǐng)參照干膠溶脹表計(jì)算特定柱體積所需的干膠量。使溶脹膠體積沉淀后占總體積的75%，上層溶劑占25%，此時(shí)，膠粒可以移動(dòng)。將溶脹后的凝膠根據(jù)裝柱要求均勻倒入柱內(nèi)，在保證膠粒不變形的前提下，應(yīng)盡可能在高壓力下裝柱，反壓不要超過1.5ba。
2. 平衡
上樣前，用洗脫液平衡層析柱至少兩個(gè)柱體積，直至基線平穩(wěn)為止。如改變?nèi)軇枳⒁饽z在新溶劑中的溶脹性質(zhì)，并據(jù)此調(diào)整柱高調(diào)節(jié)器的位置。如果使用相同的溶劑，在以后的層析中可省略此步驟。
3. 洗脫液
確保延長層析柱壽命，所有緩沖液都應(yīng)離心或經(jīng)過0.45um的膜過濾，以除去雜質(zhì)。
4. 樣品
樣品體積應(yīng)占柱總體積的1-2%，同樣在使用前需離心或經(jīng)過0.45um的膜過濾。
5. 洗脫
洗脫流速應(yīng)根據(jù)情況而定，*大線性流速約12cm/min（反壓1.5ba），建議流速為1-10cm/h。通常而言，較低的流速具有較高的分辯率。
6. 再生
凝膠再生通常需要使用2-3個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行清洗，如更換洗脫液，則需重新平衡。
7. 體積流速與線性流速的關(guān)系
線性流速=體積流速/橫截面積
8. 溶脹體積
由于Sephadex LH-20的溶脹體積依賴于溶劑，對(duì)于不同直徑的柱可根據(jù)比例增加或減少舊柱體積以便計(jì)算新體積。
新體積=舊體積×(新柱體積/舊柱體積)
9. 膠的性質(zhì)
Sephadex LH-20同時(shí)具備親水和親脂雙重性質(zhì)，且被分離物質(zhì)的極性在分離過程中起著重要作用。
10. 排阻極限 4-5KD（與所用溶劑有關(guān)）
11. 上樣量
吸附模式取決于所需分辯率
分子量小于總體積的20%
正相分配小于總體積的1%
12. 其他
膠粒形狀為球形，多孔
顆粒大小（干）18-111um（直徑）
顆粒大小中間值（干）70um（直徑）
公司提供Sephadex葡聚糖凝膠柱，歡迎來電咨詢。
了解更多產(chǎn)品信息可點(diǎn)擊： 鏈接
在使用離子交換色譜時(shí),應(yīng)該選擇什么樣的離子交換劑選擇什么樣的骨架...
因此可以把離子交換劑上的原子離子全部洗脫下來，同理，當(dāng)一定量的溶液通過交換柱時(shí)，由于溶液中的離子不斷被交換而波度逐減少，因此也可以全部被交換并吸附在樹脂上。如果有兩種以上的成分被交換吸著在離子交換劑上，用洗脫液洗脫時(shí)，在被洗脫的能力則決定于各自洗反應(yīng)的平衡常數(shù)。蛋白質(zhì)的離子交換過程...
離子交換纖維素色譜法離子交換的分類及常見種類
交聯(lián)葡聚糖離子交換劑如Sephadex，有陰離子和陽離子兩種，如DEAE-Sephadex A-25、A-50和CM-Sephadex C-50等，英文字頭A代表陰離子，C代表陽離子，數(shù)字表示型號(hào)。瓊脂糖離子交換劑如DEAE-Sephades和CM-Sepharose，是通過DESE-或CM-基團(tuán)附著在Sepharose CL-6B上制成，具有優(yōu)良的分離性能和穩(wěn)定性。
利用氫鍵吸附原理分離化合物的色譜方法是
因此可以把離子交換劑上的原子離子全部洗脫下來，同理，當(dāng)一定量的溶液通過交換柱時(shí)，由于溶液中的離子不斷被交換而波度逐減少，因此也可以全部被交換并吸附在樹脂上。如果有兩種以上的成分被交換吸著在離子交換劑上，用洗脫液洗脫時(shí)，在被洗脫的能力則決定于各自洗反應(yīng)的平衡常數(shù)。白質(zhì)的離子交換過程有...
請(qǐng)問離子交換技術(shù)和色譜分離技術(shù)是什么,在果汁加工中的應(yīng)用
因此可以把離子交換劑上的原子離子全部洗脫下來，同理，當(dāng)一定量的溶液通過交換柱時(shí)，由于溶液中的離子不斷被交換而波度逐減少，因此也可以全部被交換并吸附在樹脂上。如果有兩種以上的成分被交換吸著在離子交換劑上，用洗脫液洗脫時(shí)，在被洗脫的能力則決定于各自洗反應(yīng)的平衡常數(shù)。蛋白質(zhì)的離子交換過程...
相關(guān)評(píng)說：
德格縣精車： ______ Sephadex G 交聯(lián)葡聚糖 不同規(guī)格型號(hào)的葡聚糖用英文字母G表示,G后面的阿拉伯?dāng)?shù)為凝膠得水值的10倍.例如,G-25為每克凝膠膨脹時(shí)吸水2.5克.交聯(lián)葡聚糖凝膠的種類有G-10、G-15、G-25、G-50、G-75、G-100、G-150、和G-200.因此,“G”反映,凝膠的交聯(lián)程度,膨脹程度及分部范圍.
德格縣精車： ______ 主要看你純化的是什么東西了.葡聚糖凝膠Sephadex G-200凝膠柱層析利用大分子不能進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部最先流出柱外,而小分子物質(zhì)進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部,流速慢而最后流出柱外,來將不同分子大小的物質(zhì)分離開.一般不會(huì)改變物質(zhì)的性質(zhì),但如果是一些特殊的酶就不好說了.
德格縣精車： ______ ⑴脫鹽:高分子(如蛋白質(zhì)、核酸、多糖等)溶液中的低分子量雜質(zhì),可以用凝膠層析法除去,這一操作稱為脫鹽.本法脫鹽操作簡(jiǎn)便、快速、蛋白質(zhì)和酶類等在脫鹽過程中不易變性.適用的凝膠為SephadexG-10、15、25或Bio-Gel-p-2、4、6...
德格縣精車： ______ 凝膠色譜法分離原理: 一個(gè)含有各種分子的樣品溶液緩慢地流經(jīng)凝膠色譜柱時(shí),各分子在柱內(nèi)同時(shí)進(jìn)行著兩種不同的運(yùn)動(dòng):垂直向下的移動(dòng)和無定向的擴(kuò)散運(yùn)動(dòng).大分子物質(zhì)由于直徑較大,不易進(jìn)入凝膠顆粒的微孔,而只能分布顆粒之間,所以...
德格縣精車： ______[答案] 凝膠色譜又叫排阻色譜,用的是葡聚糖凝膠的孔徑大小不一,來對(duì)大分子化合物進(jìn)行分類.分子大的,不能通過凝膠的內(nèi)部孔的,最先流出,分子小的,可以進(jìn)入孔中的,會(huì)被凝膠保留,會(huì)較晚流出.具體原理在色譜理論里面有詳細(xì)的介紹.如有不明之...
德格縣精車： ______ 親,我公司的葡聚糖凝膠柱是符合中國藥典2000年版收載的專用于分析頭孢哌酮納、頭孢噻肟鈉、頭孢他啶及頭孢曲松鈉等品種高分子聚合物測(cè)定的專用柱.采用的是原裝進(jìn)口的 Sephadex 填料,常用的規(guī)格有下面兩種:
德格縣精車： ______ 葡聚糖凝膠是指由天然高分子-葡聚糖與其它交聯(lián)劑交聯(lián)而成的凝膠.葡聚糖凝膠主要由Pharmacia Biotech 生產(chǎn).常見的有兩大類,商品名分別為Sephadex 和Sephacryl.葡聚糖凝膠中最常見的是Sephadex 系列,它是葡聚糖與3-氯-1,2環(huán)氧丙烷...
德格縣精車： ______ 采用G-50系列的.分離蛋白質(zhì)分質(zhì)量范圍為:1500-30000.
