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    常見三種磁珠的使用原理

    核酸作為一種生物大分子,之所以能夠在水溶液中穩(wěn)定分散不沉淀,是由于三種非共價作用力的存在:(1)靜電相互作用(2)范德華力(3)氫鍵。核酸分子具有多個磷酸基團,呈現(xiàn)高度負電性,分子間互相排斥從而避免發(fā)生團聚。此外,核酸分子在水溶液中通過氫鍵與范德華力結(jié)合了大量的水分子在其周圍,形成一個水化層,也阻止了分子間的聚集。因此,要使得核酸分子結(jié)合到磁珠表面,就必須削弱上述作用力,屏蔽溶液中的靜電斥力,同時破壞核酸分子表面的水化層,使其能夠與磁珠表面相接觸,進而產(chǎn)生吸附。
    國內(nèi)目前生產(chǎn)磁珠法核酸提取試劑盒的廠家大小百余家,所用的磁珠按照表面性質(zhì)可分為以下三類:

    這是一類使用最為廣泛的磁珠。使用硅羥基磁珠提取核酸時,通常需要高濃度的離液鹽(NaI、NaClO4、GuHCl、GuSCN等)。高濃度的鹽離子能夠有效屏蔽溶液中的靜電斥力。同時,離液鹽離子還能競爭性地與磁珠表面以及核酸分子相結(jié)合,破壞二者表面原有的水化層,促進磁珠表面與核酸分子的吸附(氫鍵+范德華力)。由于常用的離液鹽如胍基離子對PCR有抑制作用,因此它們必須在后續(xù)的洗滌步驟中被去除,去除效果可通過吸光度比值進行監(jiān)控。

    這類磁珠除了能夠像硅羥基磁珠一樣在高濃度離液鹽環(huán)境中結(jié)合核酸分子之外,還能通過另一種特殊的機制與核酸分子結(jié)合。通過向溶液中加入一定濃度的PEG和NaCl,可以使得核酸分子從伸展的構(gòu)象逐漸蜷縮成小球狀,其上的負電荷也大部分被屏蔽掉,促使核酸分子吸附到磁珠上。核酸分子的分子量越大,越傾向于發(fā)生這種從伸展線團向蜷縮小球的構(gòu)象變化,因此, 通過調(diào)節(jié)鹽溶液與核酸樣本的體積比,能夠?qū)崿F(xiàn)較大分子量的核酸片段在羧基磁珠表面的優(yōu)先吸附,達到所謂的片段篩選效應(yīng)。

    此類磁珠能夠方便地通過調(diào)節(jié)pH實現(xiàn)核酸分子在表面的可逆結(jié)合。不過,由于正電荷表面對核酸分子吸附過強,容易導(dǎo)致收率偏低,因此正電荷磁珠的使用反而不如硅羥基及羧基磁珠廣泛。



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    什么叫做磁珠
    詳情請查看視頻回答

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