革蘭染色法
一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個步驟，具體操作方法是：1）涂片固定.2）草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘.3）自來水沖洗.4）加碘液覆蓋涂面染約1分鐘.5）水洗，用吸水紙吸去水分.6）加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動進(jìn)行脫色，20秒后水洗，吸去水分.7）蕃紅染色液（稀）染1分鐘后，自來水沖洗.干燥，鏡檢. 具體試驗(yàn) 流程 1、 取載玻片用紗布擦干，載玻片的一面用marker筆畫一個小圈（用來大致確定菌液滴的位置）.涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂. 2、 涂片：液體培養(yǎng)基：左手持菌液試管，在酒精燈火焰附近5cm左右打開管蓋；右手持接種環(huán)在火焰中燒灼滅菌，等冷卻后從試管中沾取菌液一環(huán)，在潔凈無脂的載玻片上涂直徑2mm左右的涂膜，最后將接種環(huán)在火焰上燒灼滅菌.固體培養(yǎng)基：先在載玻片上滴一滴無菌水，再用接種環(huán)取少量菌體，涂在載玻片上，使其薄而均勻. 3、 晾干：讓涂片在空氣中自然干燥. 4、 固定：讓菌膜朝上，通過火焰2-3次固定（以不燙手為宜）. 5、 染色：將固定過的涂片放報(bào)紙上，滴加草酸銨結(jié)晶紫液，染1min. 6、 水洗：用水緩慢沖洗涂片上的染色液，用吸水紙吸干.簡單染色結(jié)束可觀察細(xì)胞形態(tài). 7、 媒染：滴加1滴碘液，染1min，水洗. 8、 脫色：吸去殘留水，連續(xù)滴加95%乙醇脫色20-30s至流出液無紫色，立即水洗. 9、 復(fù)染：滴加蕃紅復(fù)染3-5min，水洗.至此，革蘭氏染色結(jié)束. 結(jié)果：革蘭氏陽性菌呈藍(lán)紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色. 其重要的臨床意義在于：1.鑒別細(xì)菌 2.選擇藥物 3.與致病性有關(guān)：革蘭氏陽性菌能產(chǎn)生外毒素，革蘭氏陰性菌能產(chǎn)生內(nèi)毒素；而內(nèi)毒素主要是指革蘭氏陰性菌胞壁成分中的脂多糖，兩者的致病作用不同.。
革蘭氏染色時,初染前能加碘液嗎？乙醇脫色后復(fù)染前,革蘭氏陽性菌
不可以.因?yàn)楦锾m氏碘液（媒染劑）的作用是增加結(jié)晶紫染料和細(xì)胞之間的親和性或附著力，即以某種方式幫助染料固定在細(xì)胞上，使不易脫落.改變順序可能會對效果有影響，所以最好按步驟做.脫色后復(fù)染前，理論上革蘭氏陽性菌呈紫色，陰性菌無色.復(fù)染的目的就是增加無色陰性菌與背景的反差，以便區(qū)別于紫色的陽性菌革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁厚，肽聚糖網(wǎng)狀分子形成一種透性障，當(dāng)乙醇脫色時，肽聚糖脫水而孔障縮小，故保留結(jié)晶紫-碘復(fù)合物在細(xì)胞膜上.呈紫色.革蘭氏陰性菌肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收縮，其脂含量高，乙醇將脂溶解，縫隙加大，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁，番紅復(fù)染后呈紅色.革蘭氏染色步驟：1.涂片，火焰固定2.結(jié)晶紫1min，使菌體著上紫色3.水洗4.碘液1min，碘和結(jié)晶紫形成脂溶性大分子復(fù)合物，分子大，能被細(xì)胞壁阻留在細(xì)胞內(nèi)5.水洗6.酒精脫色30s，細(xì)胞壁成分和構(gòu)造不同，出現(xiàn)不同的反應(yīng).7.水洗8.番紅復(fù)染1min，增加脫色菌與背景的反差并區(qū)別于未脫色菌.9.以吸水紙吸干，油鏡觀察。
革蘭氏染色法的原理
革蘭氏染色法的原理： 簡單來說：通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)菌細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，再用95%乙醇脫色。
具體來說：通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽性菌由于其細(xì)胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇脫色處理時，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現(xiàn)縫隙，因此能把結(jié)晶紫與碘復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其仍呈紫色； 而革蘭氏陰性菌因其細(xì)胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的溶出，因此通過乙醇脫色后仍呈無色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復(fù)染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。 G﹢菌：細(xì)胞壁厚，肽聚糖網(wǎng)狀分子形成一種透性屏障，當(dāng)乙醇脫色時，肽聚糖脫水而孔隙縮小，故保留結(jié)晶紫-碘復(fù)合物在細(xì)胞膜上。
呈紫色。 Gˉ菌：肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收縮，其脂含量高，乙醇將脂溶解，縫隙加大，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁，番紅染液復(fù)染后呈紅色。
擴(kuò)展資料：革蘭氏染色法，是指細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種重要的鑒別染色法，屬于復(fù)染法。這種染色法是由丹麥醫(yī)生革蘭于1884年所發(fā)明，最初是用來鑒別肺炎球菌與克雷伯肺炎菌。
革蘭染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個步驟。未經(jīng)染色的細(xì)菌，由于其與周圍環(huán)境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難區(qū)別。
經(jīng)染色后，陽性菌呈紫色，陰性菌呈紅色，可以清楚地觀察到細(xì)菌的形態(tài)、排列及某些結(jié)構(gòu)特征，從而用以分類鑒定。 操作流程：革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個步驟，具體操作方法是： （1）載玻片固定。
在無菌操作條件下，用接種環(huán)挑取少量細(xì)菌于干凈的載玻片上涂布均勻，在火焰上加熱以殺死菌種并使其粘附固定。 （2）草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘。
（3）自來水沖洗，去掉浮色。 （4） 用碘-碘化鉀溶液媒染1分鐘，傾去多余溶液。
（5）用中性脫色劑如乙醇（95%）或丙酮酸脫色30秒，革蘭氏陽性菌不被褪色而呈紫色，革蘭氏陰性菌被褪色而呈無色。酒精脫色為整個流程最關(guān)鍵的一步。
（6）用蕃紅染液或者沙黃復(fù)染30秒，革蘭氏陽性菌仍呈紫色，革蘭氏陰性菌則呈現(xiàn)紅色。革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌即被區(qū)別開。
參考鏈接：百度百科-革蘭氏染色法。
革蘭氏染色的詳細(xì)步驟
革蘭氏染色
一、 目的：在細(xì)胞發(fā)放之前，利用標(biāo)準(zhǔn)的革蘭氏染色法對即將發(fā)放的細(xì)胞懸液進(jìn)行檢測，判斷細(xì)胞懸液中是否含有革蘭氏陽性菌或革蘭氏陰性菌。
二、 原理：
通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽性菌由于其細(xì)胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇脫色處理時，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現(xiàn)縫隙，因此能把結(jié)晶紫與碘復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細(xì)胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的溶出，因此通過乙醇脫色后仍呈無色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復(fù)染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
三、實(shí)驗(yàn)用品準(zhǔn)備：
滅菌玻片、10-100ul移液器、10-100ul滅菌移液吸頭、100ul-1000ul移液器、100ul-1000ul移液吸頭、接種環(huán)、酒精燈、打火機(jī)、革蘭氏染色液、吸水紙、顯微鏡、香柏油、擦鏡紙、計(jì)時器
四、 操作：
1 涂片：取滅過菌的載玻片于實(shí)驗(yàn)臺上，用移液槍吸取10ul待檢樣品滴在載玻片的中央，用燒紅冷卻后的接種環(huán)將液滴涂布成一均勻的薄層，涂布面不宜過大。
2 干燥：將標(biāo)本面向上，手持載玻片一端的兩側(cè)，小心地在酒精燈上高處微微加熱，使水分蒸發(fā)，但切勿緊靠火焰或加熱時間過長，以防標(biāo)本烤枯而變形。
3 固定：固定常常利用高溫，手持載玻片的一端，標(biāo)本向上，在酒精燈火焰處盡快的來回通過2-3次，共約2-3秒種，并不時以載玻片背面加熱觸及皮膚，不覺過燙為宜（不超過60℃），放置待冷后，進(jìn)行染色。
4 初染：在涂片薄膜上滴加草酸銨結(jié)晶紫1-2滴，使染色液覆蓋涂片，染色約1min。
5 水洗：斜置載玻片，在自來水龍頭下用小股水流沖洗，直至洗下的水呈無色為止。
6 媒染：用100-1000ul移液槍吸取約300ul碘液滴在涂片薄膜上，使染色液覆蓋涂片，染色約1min。
7 水洗：斜置載玻片，在自來水龍頭下用小股水流沖洗，直至洗下的水呈無色為止。
8 脫色：斜置載玻片，滴加95%乙醇脫色，至流出的乙醇不現(xiàn)紫色為止，大約需時20-30S，隨即水洗。
9 復(fù)染：在涂片薄膜上滴加沙黃染液1-2滴，使染色液覆蓋涂片，染色約1min。
10 水洗：斜置載玻片，在自來水龍頭下用小股水流沖洗，直至洗下的水呈無色為止。
11 干燥、觀察：用吸水紙吸掉水滴，待標(biāo)本片干后置顯微鏡下，用低倍鏡觀察，發(fā)現(xiàn)目的物后滴一滴浸油在玻片上，用油鏡觀察細(xì)菌的形態(tài)及顏色，紫色的是革蘭氏陽性菌，紅色的是革蘭氏陰性菌
要得到正確的革蘭氏染色結(jié)果注意哪些操作,哪一步是關(guān)鍵步驟
革蘭氏染色：（1）涂片：涂片方法與簡單染色涂片相同.（2）晾干：與簡單染色法相同.（3）固定，與簡單染色法相同（4）結(jié)晶紫色染色：將玻片置于廢液缸玻片擱架上，加適量（以蓋滿細(xì)菌涂面）的結(jié)晶紫染色液染色1分鐘.（5）水洗：傾去染色液，用水小心地沖洗.（6）媒染：滴加盧哥氏碘液，媒染1min.(7)水洗：用水洗去碘液.（8）脫色：將玻片傾斜，連續(xù)滴加95%乙醇脫色20—25s至流出液無色，立即水洗.（9）復(fù)染：滴加蕃紅復(fù)染5min.(10)水洗：用水洗去涂片上的蕃紅染色液.（11）晾干：將染好的涂片放空氣中晾干或者用吸水紙吸干.（12）鏡檢：鏡檢時先用低倍，再用高倍，最后用油鏡觀察，并判斷菌體的革蘭氏染色反應(yīng)性.（13）實(shí)驗(yàn)完畢后的處理：①將浸過油的鏡頭按下述方法擦拭干凈，a.先用擦鏡紙將油鏡頭上的油擦去.b.用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭擦2—3次.c.再用干凈的擦鏡紙將鏡頭擦2—3次.注意擦鏡頭時向一個方向擦拭.②看后的染色玻片用廢紙將香柏油擦干凈.1.革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是酒精脫色.如脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而染成陰性菌；如脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也會被染成革蘭氏陽性菌.脫色時間的長短還受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影響，難以嚴(yán)格規(guī)定.2.染色過程中勿使染色液干涸.用水沖洗后，應(yīng)吸去玻片上的殘水，以免染色液被稀釋而影響染色效果.3.選用幼齡的細(xì)菌.G+菌培養(yǎng)12h-16h,E.coli培養(yǎng)24h.若菌齡太老，由于菌體死亡或自溶常使革蘭氏陽性菌轉(zhuǎn)呈陰性反應(yīng).。
微生物鑒別染色方法有哪些
微生物檢驗(yàn)常用染色法如下：1、革蘭氏染色法；2、抗酸染色法；3、美蘭染色法；4、異染顆粒染色法；5、細(xì)菌鞭毛染色法；6、莢膜染色法芽孢染色法；7、布氏桿菌科茲洛夫斯基染色法；8、結(jié)核桿菌熒光染色法等主要染色法。
用美藍(lán)染色法對酵母細(xì)胞進(jìn)行死活鑒別時為什么要控制染液濃度 和染色時 ...
美藍(lán)濃度高和染色時間過長都會增加酵母菌的死亡，美蘭有氧化性，濃度太高會使活菌很快致死，濃度低老齡細(xì)胞與活細(xì)胞不易區(qū)分；染色時間短，活細(xì)胞還沒從藍(lán)變無色，觀察到的活細(xì)胞數(shù)量會比預(yù)計(jì)的少，染色時間長，活細(xì)胞數(shù)量也會減少。
常見的染衣服的方法有哪些
染衣服常用方法有：1、革蘭氏染色法，是一種復(fù)染色方法，即選用結(jié)晶紫和石碳酸復(fù)紅兩種染液染色的方法，依此將細(xì)菌分成革蘭氏陽性菌(記G+)和革蘭氏陰性菌(記G-)。2、簡單染色法，是用一種染液染色的方法，如美蘭或石碳酸復(fù)紅等，此法只能顯示細(xì)菌的形態(tài)及大小。3、特殊結(jié)構(gòu)染色法，是染色細(xì)菌細(xì)胞...
考馬斯亮藍(lán)法測蛋白質(zhì)含量
考馬斯亮藍(lán)染色法的突出優(yōu)點(diǎn)是：靈敏度高，據(jù)估計(jì)比Lowry法約高四倍，其最低蛋白質(zhì)檢測量可達(dá)1mg。這是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)與染料結(jié)合后產(chǎn)生的顏色變化很大，蛋白質(zhì)-染料復(fù)合物有更高的消光系數(shù)，因而光吸收值隨蛋白質(zhì)濃度的變化比Lowry法要大的多。測定快速、簡便，只需加一種試劑。完成一個樣品的測定，只需要...
2.革蘭染色\/抗酸染色是否成功,有哪些問題需要注意?
而抗酸染色只需要三個步驟。抗酸染色分枝桿菌的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì)，包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色，要經(jīng)過加熱和延長染色時間來促使其著色。但分枝桿菌中的分枝菌酸與染料結(jié)合后，就很難被酸性脫色劑脫色，故名抗酸染色。齊-尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅牢固...
什么染料能給衣服染色
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微生物染色的染色方法
微生物的染色方法主要分為單一染色法和復(fù)色染色法。單一染色法使用一種染料對微生物進(jìn)行染色，主要用于形態(tài)觀察，而復(fù)色染色法則結(jié)合多種染料，有助于微生物的鑒別。例如，革蘭氏染色法就能夠區(qū)分革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。食品微生物檢驗(yàn)通常采用單一染色法和革蘭氏染色法。在單一染色法中，由于細(xì)菌通常...
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