dna的提取方法
dna的提取方法：濃鹽法、SDS法、CTAB法等。
一、 濃鹽法。
1、根據(jù)DNA和RNA在電解溶液中的溶解度不同，可將二者分離。
2、常用1 mol/L NaCl抽提，得到的DNP黏液中加入含有少量辛醇的氯仿一起搖蕩，使之乳化，再離心，使蛋白質(zhì)凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA則位于上層水相中。
3、回收水相，用2倍體積95%的乙醇可將DNA鈉鹽沉淀出來。
二、 SDS法。
1、將生物細(xì)胞破碎后，加入SDS使細(xì)胞膜裂解，同時使蛋白質(zhì)變性，將蛋白質(zhì)和多糖等雜質(zhì)與DNA分開。
2、加入乙酸鉀可使SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物轉(zhuǎn)變成溶解度更小的鉀鹽形式，使沉淀更加完全。
三、水抽提法。
1、利用核酸溶解于水的性質(zhì)，將組織細(xì)胞破碎后，用低鹽溶液除去RNA，然后將沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，離心后收集上清液。
2、在上清中加入固體NaCl調(diào)節(jié)至2.6 mol/L，加入2倍體積95%乙醇，立即用攪拌法攪出。然后，分別用66%、80%和95%乙醇以及丙酮洗滌。
3、最后，在空氣中干燥即得DNA樣品。此法提取的DNA中蛋白質(zhì)含量較高，可在提取過程中加入SDS加以改良。
分類: 教育/學(xué)業(yè)/考試 >> 學(xué)習(xí)幫助
問題描述:
實驗中要注意的要點(diǎn)
解析:
一.DNA的提取方法簡介
為了研究DNA分子在生命代謝中的作用，常常需要從不同的生物材料中提取DNA.由于DNA分子在生物體內(nèi)的分布及含量不同，要選擇適當(dāng)?shù)牟牧咸崛NA。
動植物中，小牛胸腺۰動物肝臟۰魚類 *** ，植物種子的胚中都含有豐富的DNA。
微生物中，谷氨酸菌體含7%~10%，面包酵母含4%，啤酒酵母含6%，大腸肝菌含9%~10%。
從各種材料中提取DNA方法不同，分離提取的難易程度也不同。
對于低等生物。如從病毒中提取DNA 比較容易，多數(shù)病毒DNA 分子量較小，提取時易保持其結(jié)構(gòu)完整性。
從細(xì)菌及高等動植物中提取DNA難度大一些。細(xì)菌DNA 分子量較大，一般達(dá)2×10 道爾頓。因此易被機(jī)械張力剪斷。細(xì)菌DNA，除核DNA 外，還有質(zhì)粒DNA 等。
1、核酸的理化性質(zhì)
RNA和核苷酸的純品都呈白色粉末或結(jié)晶，DNA則為白色類似石棉樣的纖維狀物。除肌苷酸、鳥苷酸具有鮮味外，核酸和核苷酸大都呈酸味。
DNA、RNA和核苷酸都是極性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有機(jī)溶劑，它們的鈉鹽比游離酸易溶于水，RNA鈉鹽在水中溶解度可達(dá)40g/L。DNA在水中為10g/L，呈黏性膠體溶液。在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定。
天然狀態(tài)的DNA 是以脫氧核糖 *** 白(DNP)形式存在于細(xì)胞核中。要從細(xì)胞中提取DNA 時，先把DNP抽提出來，再把P除去，再除去細(xì)胞中的糖，RNA 及無機(jī)離子等，從中分離DNA 。
DNP和RNP在鹽溶液中的溶解度受鹽濃度的影響而不同。DNP在低濃度鹽溶液中，幾乎不溶解，如在0.14 mol/L的氯化鈉溶解度最低，僅為在水中溶解度的1%，隨著鹽濃度的增加溶解度也增加，至1mol/L氯化鈉中的溶解度很大，比純水高2倍。
RNP在鹽溶液中的溶解度受鹽濃度的影響較小，在0.14mol/L氯化鈉中溶解度較大。因此，在提取時，常用此法分離這兩種 *** 白。
2.細(xì)胞的破碎
細(xì)菌有堅硬的細(xì)胞壁，首先要破碎經(jīng)胞。方
法有三種：①機(jī)械方法：超聲波處理法、研磨法、勻漿法；②化學(xué)試劑法：用SDS處理細(xì)胞； ③酶解法：加入溶菌酶或蝸牛酶，都可使細(xì)胞壁破碎。
由于高等動物DNA 主要存在于細(xì)胞核與線粒體中，所以提取時有兩個困難（高等植物與此類似）：
①破碎細(xì)胞難；從處死動物٠分離組織器宮到破碎細(xì)胞費(fèi)時長。在此時期間DNA 可能會被DN ase降解，而動物組織：特別是肌肉組織很難破碎,即使是較易破碎的肝٠腎等組織也往往使用組織勻漿器，易造成DNA 斷裂。
②分子量大，一般比細(xì)菌的大2—3個數(shù)量級，比病毒的大4—5個數(shù)量。對不同生物材料，要根據(jù)具體情況選擇適當(dāng)?shù)姆蛛x提取方法。
3.DNA提取的幾種方法
(1).濃鹽法
利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提,得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖蕩,使乳化,再離心除去蛋白質(zhì),此時蛋白質(zhì)凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位于上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉淀出來.
也可用0.15 MNaCL液反復(fù)洗滌細(xì)胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白,再按氯仿---異醇法除去蛋白.
兩種方法比較,后種方法使核酸降解可能少一些.
以稀鹽酸溶液提取DNA 時,加入適量去污劑,如SDS可有助于蛋白質(zhì)與DNA 的分離。在提取過程中為抑制組織中的DNase對DNA 的降解作用,在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉,并稱SSC溶液,提取DNA.
（2）.陰離子去污劑法:
用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質(zhì)變性,可以直接從生物材料中提取DNA .由于細(xì)胞中DNA與蛋白質(zhì)之間常借靜電引力或配位鍵結(jié)合,因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵,所以常用陰離子去污劑提取DNA.
（3）.苯酚抽提法:
苯酚作為蛋白變性劑,同時抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時,由于蛋白與DNA 聯(lián)結(jié)鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團(tuán)與苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。離心分層后取出水層，多次重復(fù)操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性質(zhì)，用乙醇沉淀DNA 。此時DNA是十分粘稠的物質(zhì)，可用玻璃漫漫繞成一團(tuán)，取出。此法的特點(diǎn)是使提取的DNA保持天然狀態(tài) .
（ 4）.水抽提法:
利用核酸溶解于水的性質(zhì),將組織細(xì)胞破碎后,用低鹽溶液除去RNA，然后將沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,離心后收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調(diào)節(jié)至2.6M.加入2倍體積95%乙醇,立即用攪拌法攪出.然后分別用66% ٠80%和95%乙醇以及丙銅洗滌,最后在空氣中干燥,既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質(zhì)含量較高,故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良,在提取過程中加入SDS.
na的制取
方法：1、將塊狀氫氧化鈉放在鐵片中央（片狀需要堆疊起來），插入鐵絲。 2、鐵絲連接電源正極，鐵片連接電源負(fù)極。 3、通電，反應(yīng)開始，陽極析出水和氧氣，陰極析出金屬鈉。 +）4OH- -4e-=2 H2O+O2↑ -）Na+ + e-=Na 鈉會順鐵片滾出，滾出時可能發(fā)生燃燒，可以用干燥的鋁箔蓋滅。 用小刀刮取...
Na是如何置得的 人們怎么從那的化合物中提取鈉單質(zhì)的? 說一下細(xì)則``
所以工業(yè)上采取電解熔融NaCl得到Na
家庭(小型實驗室)怎樣制取金屬鈉?
方法：1、將塊狀氫氧化鈉放在鐵片中央（片狀需要堆疊起來），插入鐵絲。 2、鐵絲連接電源正極，鐵片連接電源負(fù)極。 3、通電，反應(yīng)開始，陽極析出水和氧氣，陰極析出金屬鈉。 +）4OH- -4e-=2 H2O+O2↑ -）Na+ + e-=Na 鈉會順鐵片滾出，滾出時可能發(fā)生燃燒，可以用干燥的鋁箔蓋滅。 用小刀刮取...
如何從食鹽中提取鈉
NaCl； （3）利用硫酸鈉能與氯化鋇反應(yīng)而得到氯化鈉，為將硫酸鈉除盡且不帶入新的雜質(zhì)，則應(yīng)逐滴滴加氯化鋇溶液至不再產(chǎn)生沉淀，則可達(dá)到除盡硫酸鈉時又不引入新的雜質(zhì)． 故答案為：（1）燒杯、漏斗、玻璃棒，蒸發(fā)結(jié)晶； （2）Na 2 SO 4 ，NaCl； （3）逐滴滴加氯化鋇溶液，不再產(chǎn)生...
...Al,Fe,Mg,Na的所有方程式,并附有工業(yè)上提取它們的具體步驟,最好是流...
制Na:2NaCl(熔融)===(電解)2Na+Cl2 制Mg:MgCl2(熔融)===(電解)Mg+Cl2 制Al:2Al2O3(熔融)===(電解)4Al+3O2 制Fe:Fe2O3+3CO===(高溫)2Fe+3CO2 制Cu:同鐵。也可以用生物煉銅。也可以高溫冶煉黃銅礦，再電解精煉其產(chǎn)物。
工業(yè)制取單質(zhì)na的辦法有哪些?
金屬鈉是在1807年通過電解氫氧化鈉制得的，這個原理應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)，約在1891年才獲得成功。1921年電解氯化鈉制鈉的工業(yè)方法實現(xiàn)了。由于金屬鈉在現(xiàn)代技術(shù)上得到重要應(yīng)用，它的產(chǎn)量顯著地增加。目前，世界上鈉的工業(yè)生產(chǎn)多數(shù)是用電解氯化鈉的方法，少數(shù)仍沿用電解氫氧化鈉的方法。電解氯化鈉制金屬鈉通常在...
怎么在海水中提取na??
首先把海水制成鹽（氯化鈉）然后電解氯化鈉即可：2NaCl=電解=2Na+Cl2↑ 滿意請采納，謝謝~歡迎追問
工業(yè)上用電解法制取鈉,鎂,鋁的化學(xué)方程式
Na：電解熔融的NaCl：2NaCl=2Na+Cl?↑ Mg：電解熔融的MgCl?：MgCl?=Mg+Cl?↑ Al：電解Al?O?：2Al?O?=4Al+3O?↑ 電解鋁就是通過電解得到的鋁。現(xiàn)代電解鋁工業(yè)生產(chǎn)采用冰晶石-氧化鋁融鹽電解法。熔融冰晶石是溶劑，氧化鋁作為溶質(zhì)...
如何在海水中,提取k和Na單質(zhì)(化學(xué)方法)
分辨kcl和Nacl簡單，用焰色反應(yīng)，就是用鉑絲蘸取固體，用酒精燈來燒，透過藍(lán)色鈷玻璃片的就是kcl 那叫分離 用重結(jié)晶，利用溶解度變化差異．將晶體溶于溶劑或熔融以后，又重新從溶液或熔體中結(jié)晶的過程叫重結(jié)晶。混合在一起的兩種鹽類，如果它們在一種溶劑中的溶解度隨溫度的變化差別很大，則可在較高...
淬取Na時應(yīng)該注意什么?
9. 乳化液過濾法：漏斗中放置少許玻璃棉（或脫脂棉）及無水硫酸鈉，對乳化液和有機(jī)相進(jìn)行過濾，該方法應(yīng)注意的是脫脂棉要進(jìn)行丙酮的索氏抽提，確保污染的消除，另外為消除玻璃棉（脫脂棉）對目標(biāo)物的吸附，可用多次少量有機(jī)溶劑輔助完全轉(zhuǎn)移。10. 添加重蒸水：當(dāng)乳化現(xiàn)象嚴(yán)重，采用以上的一種或多種...
相關(guān)評說：
東陽市工步： ______ 請教DNA提取的實用的方法 這個很難說,尿液里只有白細(xì)胞能提出DNA,如果這個人的尿液里含有白細(xì)胞(正常人不含,或非常少,只有疾病情況下會增多).那么就可以提取DNA.但是土壤里含有很多微生物,這些微生物的DNA比起尿液里的要多很多.
東陽市工步： ______ 關(guān)于DNA的提取方法在《分子克隆》一書中有詳細(xì)介紹,其中最常用的質(zhì)粒提取方法包括: SDS堿裂解法制備質(zhì)粒DNA煮沸裂解法制備質(zhì)粒DNA牙簽法小量制備質(zhì)粒DNASDS裂解法提取質(zhì)粒DNA 這其中SDS堿裂解法又是最常使用的提取方法. 當(dāng)然針對不同組織樣品DNA的提取方法是不同的,具體還是要參考《分子克隆》等工具書. 另外,針對不同組織的DNA樣品,就是都有很多成熟的試劑盒可以使用.如果不是大批量使用或者經(jīng)費(fèi)充足的話,可以考慮購買試劑盒,一般可以提取到更高質(zhì)量的DNA,并且也可以節(jié)約不少自己摸索的時間.
東陽市工步： ______ 原理:1.析出溶解在NaCl溶液中的DNA.2.用冷酒精提取出含雜質(zhì)較少的DNA.3.DNA在沸水浴時被二苯胺染成藍(lán)色.方法步驟:1.提取細(xì)胞核物質(zhì):順時針方向攪拌,稍快,稍重. 5 min2.溶解DNA:3.析出含DNA的黏稠物:蒸餾水300mL,逆時針方向攪拌,緩慢4.過濾:取黏稠物5.再溶解:順時針方向攪拌,較慢.3 min6.過濾:取濾液.7.提取出含雜質(zhì)較少的DNA,逆時針方向攪拌,稍慢.5 min8.DNA的鑒定:沸水浴5min
東陽市工步： ______ 植物DNA提取方法 方法一:1.取兩片幼嫩新鮮葉片,置于預(yù)冷的研缽中,倒入適量液氮,迅速研磨成粉末狀,隨后加入3ml預(yù)熱的2%CTAB抽提緩沖液和50ul抗氧化劑2-巰基乙醇,繼續(xù)研磨成略有流動性的糊狀或粥狀,轉(zhuǎn)入1.5ml的離心管中,于...
東陽市工步： ______[答案] DNA的提取方法簡介 為了研究DNA分子在生命代謝中的作用,常常需要從不同的生物材料中提取DNA.由于DNA分子在生物體內(nèi)的分布及含量不同,要選擇適當(dāng)?shù)牟牧咸崛NA. 動植物中,小牛胸腺?動物肝臟?魚類精子,植物種子的胚中都含有豐...
東陽市工步： ______ 分子生物學(xué)的發(fā)展迅速,生物技術(shù)的研究領(lǐng)域逐漸拓寬到生物科學(xué)的各個方面.大豆... 從而提高提取DNA的純度〔8〕 . 根據(jù)所用材料的不同而采取不同的提取方法,通常...
東陽市工步： ______[答案] 1.提取DNA一定要加蛋白酶protease以及硫氰酸胍使樣本中的蛋白質(zhì)失活.2.萃取DNA時要將蛋白質(zhì)全部分離.3.樣本置于-20°存放.4.任何試劑盒提取的DNA都沒有傳統(tǒng)芬-氯仿法提取的DNA純度高,所以最好用傳統(tǒng)方法提取.
東陽市工步： ______ 植物DNA提取的方法基本是通用的,用植物的根,莖,葉,新鮮組織就可以提取 儀器(1) 電熱恒溫水浴鍋;(2) 離心機(jī);(3) 液氮罐;(4) 研缽;(5)離心管;(6)移液管;(7)吸管;(8)穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀;(9)可調(diào)微量移液器...
東陽市工步： ______ 高中: 原理: 1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA. 2.用冷酒精提取出含雜質(zhì)較少的DNA. 3.DNA在沸水浴時被二苯胺染成藍(lán)色. 方法步驟: 1.提取細(xì)胞核物質(zhì):順時針方向攪拌,稍快,稍重. 5 min 2.溶解DNA: 3.析出含DNA的黏稠物:蒸餾水...
東陽市工步： ______ 1、提取DNA的簡易方法: 1)、從全血中提取DNA:取20μl抗凝血于0.5ml無菌管中,加500μl左右的ddH2O混勻后,12000rpm離心2分鐘,棄上清,(若沉淀中仍 有紅細(xì)胞,需重復(fù)此操作1-2次)加入樣品提取液20μl,混勻,100℃煮10分鐘(可...
