組織特異性啟動子試驗方法
為了進行組織特異性啟動子試驗，首先從馬鈴薯試管苗葉片中提取總DNA。具體步驟是利用CTAB法，這是一個常用的DNA提取方法，能夠有效地從馬鈴薯組織中提取出DNA。
接著，目標片段的擴增是關(guān)鍵步驟。我們從Genbank數(shù)據(jù)庫中查找了已知的馬鈴薯塊莖patatin啟動子序列，并借助Oligo6.0軟件設(shè)計了引物G1（5′ GTGGAA CGG AGA CAT G IT ATC A 3′）和G2（5′ CGCATC AAA TCA GAA ATA A1Tr GG 3′）。在PCR反應中，以提取的DNA作為模板，G1和G2作為引物，通過95℃預熱、循環(huán)擴增（95℃ 40 s，54℃ 50 S，72℃ 60 s）共30個循環(huán)，然后進行電泳確認產(chǎn)物。成功擴增的單一條帶被回收，用于后續(xù)步驟。
PCR產(chǎn)物與T載體的連接及鑒定是實驗的下一步。通過熱激法，將PCR回收產(chǎn)物與T載體連接，然后利用大腸桿菌DH5α進行轉(zhuǎn)化，并通過藍白斑篩選來鑒定陽性重組子。陽性重組子被命名為pGEM—TG，并進一步送往上海生物工程公司進行測序，以確認連接的精確性。
最后，對獲得的序列進行深入分析。使用DNAman軟件進行同源性分析，以了解啟動子序列的特異性。啟動子序列調(diào)控元件的分析則通過植物順勢調(diào)控元件數(shù)據(jù)庫PLACE和PlantCaret來完成，以揭示其在植物生理過程中的調(diào)控作用。這些步驟的實施，有助于我們理解馬鈴薯特異性啟動子的功能和調(diào)控機制。
擴展資料
組織特異性啟動子稱之為器官特異性啟動子。根據(jù)作用方式及功能可將啟動子分為三類，它們是組成型啟動子、誘導型啟動子和組織特異型啟動子。
心血管系統(tǒng) | 組織(細胞)特異性基因調(diào)控
組織\/細胞特異性啟動子能夠增強AAV對特定組織或細胞的感染效率。TIE1啟動子在血管內(nèi)皮細胞中特異性表達，可作為靶向血管內(nèi)皮細胞的特異性啟動子。SM22α啟動子在平滑肌細胞中特異性表達，適用于靶向感染平滑肌細胞。注射方式和劑量對AAV的遞送至關(guān)重要。系統(tǒng)性注射（如尾靜脈注射）和原位注射（如結(jié)扎法和...
如何實現(xiàn)基因在腎臟組織的特異性敲低?
常見的聚合酶III啟動子包括U6和H1，它們主要用于啟動較短的RNA，能有效調(diào)控shRNA的高表達，實現(xiàn)基因沉默。然而，由于缺乏組織特異性，它們難以滿足特定組織中基因表達調(diào)控的需求。為解決這一問題，可利用miRNA骨架結(jié)合聚合酶II型啟動子，實現(xiàn)RNA干擾的組織特異性表達。例如，使用腎臟特異性啟動子NPHS1或KSP...
過表達載體的構(gòu)建方法及步驟
構(gòu)建過表達載體是基因工程中用于增加特定基因表達量的關(guān)鍵步驟。常規(guī)過表達載體通常包含促動子（Promoter）、基因編碼區(qū)（CDS）、連接區(qū)（linker）、熒光基因（Fluorescent gene）和抗藥篩選基因（抗藥篩選gene）。基因過表達載體類型多樣，包括廣泛啟動子基因表達載體、組織特異性啟動子基因表達載體以及誘導啟動...
心血管分子影像研究前沿
同時經(jīng)組織學證實在大鼠心肌內(nèi)有畸胎瘤形成。藥物劑量的更昔洛韋可終止攜帶有病毒HSV-ttk的細胞合成DNA，所以HSV-ttk既是PET報告基因，同時也是自殺基因。通過用組織特異性的啟動子替換泛素的啟動子，將來可進行移植干細胞分化的研究。總之，多模式報告基因，結(jié)合非侵入性的影像技術(shù)，使得較長時間內(nèi)以非侵入...
啟動子的分類及應用
Ⅱ型啟動子在使用上有三大類：組成型啟動子（廣泛性啟動子）、組織特異性啟動子、誘導型啟動子。特異性啟動子僅在特定細胞表達，適用于動物實驗；誘導啟動子需要加入特定藥物才能激發(fā)或抑制活性，如四環(huán)素誘導TRE\/TRE3G表達；而最常用的組成型啟動子（廣泛性啟動子）在多數(shù)細胞中都能維持穩(wěn)定表達，當然，...
你需要知道的載體元件功能-選擇合適正確的載體
關(guān)于載體的選擇，我們吉凱基因曾舉辦過專門的在線課程，講解了“工具病毒”載體的選擇與應用指南，感興趣的老師可以查看相關(guān)內(nèi)容。以下將簡單介紹如何選擇合適的載體元件。一、啟動子 啟動子分為三類：組成型\/廣譜啟動子、組織\/細胞基因特異性啟動子、誘導表達啟動子。1、組成型\/廣譜啟動子：在組成型啟動子...
組織特異性表達克隆載體的定義是什么
組織特異性表達克隆載體則是特指一種在特定組織中能夠高效表達目的基因的載體。其關(guān)鍵在于引入了與特定組織相關(guān)的啟動子，只有在該組織的細胞環(huán)境中，這種啟動子才能有效調(diào)控目標基因的表達。啟動子作為基因表達調(diào)控中的重要元件，能夠吸引RNA聚合酶，啟動轉(zhuǎn)錄過程。組織特異性啟動子具有組織特異性，它們僅在...
什么是組織特異性表達載體?
在較高等的真核生物中，有一類特殊的調(diào)控序列（啟動子等）可以調(diào)控基因只能在一定的組織中才進行有效的表達。選用這樣的調(diào)控序列可以構(gòu)建一系列組織特異性表達載體，為研究動植物發(fā)育和人類基因治療等提供了有效的手段。目前已構(gòu)建的組織特異性表達載體有乳腺組織特異性表達載體、腫瘤細胞特異性表達載體、神...
轉(zhuǎn)基因動物的轉(zhuǎn)移方法
轉(zhuǎn)基因動物可用于觀察目的基因在胚胎不同發(fā)育階段的特異性表達、關(guān)閉及調(diào)控機制,了解調(diào)控順序(如增強子、啟動子)在組織特異性表達中的作用,例如人腎素基因在小鼠體內(nèi)的特異性表達可能與該基因的5’端側(cè)翼順序有關(guān)。此外,轉(zhuǎn)基因動物還可用于識別動物發(fā)育過程中的基因(包括內(nèi)源基因)及其活動,也可測出與動物發(fā)育相關(guān)的...
【干貨】Cre-loxP重組酶系統(tǒng)介紹
然而，這種方法存在局限性，如難以精確研究特定基因在特定組織中的功能，并可能因某些基因的缺失導致胚胎發(fā)育異常，引發(fā)動物在出生后不久死亡的問題。為解決上述問題，科學家引入了條件性基因敲除策略，以Cre\/loxP重組酶系統(tǒng)為核心。通過利用組織特異性啟動子控制Cre在特定組織的表達，可以在特定組織或細胞中對...
相關(guān)評說：
丹江口市空間： ______ 許多研究工作者用來測定各種體重調(diào)節(jié)基因及其產(chǎn)物作用的另一種方法是生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因小鼠.凡被認為在體重調(diào)節(jié)或能量代謝中有重要作用的基因,作為候選基因,并按計劃...
丹江口市空間： ______ 克隆載體中加入一些與表達調(diào)控有關(guān)的元件即成為表達載體.組織特異性就是多細胞生物個體,每個組織具有與其它組織相區(qū)別的特征,組織特異性的存在是取決于構(gòu)成該組織主要成分的細胞性質(zhì).而組織特異性表達克隆載體就是帶有某種組織特殊的啟動子,在該組織中才能表達
丹江口市空間： ______ 首先構(gòu)建以Tol2轉(zhuǎn)座子為基礎(chǔ)的enhancertrap載體,報告基因選用GFP或RFP,最小啟動子來自斑馬魚gata2基因;將上述載體與體外轉(zhuǎn)錄得到的Tol2轉(zhuǎn)座酶的mRNA共同注射到斑馬魚的單細胞受精卵中,受精卵長大后成為founder;Founder外交(out-cross)得到F1代胚胎,從中挑選出對于報告基因具有組織特異性表達模式的胚胎,拍照記錄后分類培養(yǎng);F1長大后通過linker-mediatedPCR的方法鑒定對應于GFP(或RFP)表達圖式的Tol2插入位點,并通過與已知基因組數(shù)據(jù)比較,對插入位點進行定位與分析;通過外交純化得到轉(zhuǎn)基因魚,直至得到只含有單個插入品系的轉(zhuǎn)基因魚
丹江口市空間： ______ 病毒在感染細胞后就會表達蛋白,主要是包裝蛋白和復制必須蛋白,這個細胞不管是植物細胞還是動物細胞.
丹江口市空間： ______ 基因附立在染色體上,曾線形分布
丹江口市空間： ______[答案] 啟動子是一段位于結(jié)構(gòu)基因5'端上游區(qū)的DNA序列,能活化RNA聚合酶,使之與模板DNA準確地相結(jié)合并具有轉(zhuǎn)錄起始的特異性.因為基因的特異性轉(zhuǎn)錄取決于酶勺啟動子能否有效地形成二元復合物,故RNA聚合酶如何有效地找到啟動子并與之相結(jié)...
丹江口市空間： ______ 第一個過程,轉(zhuǎn)錄:以一條DNA鏈為膜板合成一條mRNA,此過程在細胞核內(nèi)完成后,mRNA通過核孔進入細胞質(zhì) 第二個過程,翻譯:以這條mRNA為膜板,tRNA攜帶氨基酸與之進行堿基互補配對,然后經(jīng)脫水縮合,形成一條肽鏈,該過程在核糖體上進行.肽鏈再經(jīng)過旋轉(zhuǎn)纏繞最后形成蛋白質(zhì).
丹江口市空間： ______ 基因結(jié)構(gòu) 結(jié)構(gòu)基因的結(jié)構(gòu) 人類結(jié)構(gòu)基因4個區(qū)域:①編碼區(qū),包括外顯子與內(nèi)含子;②前導區(qū),位于編碼區(qū)上游,相當于RNA5'末端非編碼區(qū)(非翻譯區(qū));③尾部區(qū),位于RNA3'編碼區(qū)下游,相當于末端非編碼區(qū)(非翻譯區(qū));④調(diào)控區(qū)...
