cfDNA+甲基化，監(jiān)測造血干細胞移植并發(fā)癥
中國每年進行的造血干細胞移植手術(shù)和腎移植手術(shù)均超過萬例，術(shù)后患者需長期服用免疫抑制藥物以防止免疫排斥導(dǎo)致移植器官損傷。盡管如此，急性或慢性排斥引起的移植器官損傷仍屢見不鮮。臨床實踐中，移植器官損傷需通過活檢證實，但缺乏無創(chuàng)監(jiān)測手段。同時，免疫系統(tǒng)抑制不僅可能誘發(fā)潛伏病毒的再激活，還會顯著增加后續(xù)感染風(fēng)險。
細胞外游離DNA(cfDNA)是人體細胞、微生物等死亡后釋放到體液中的DNA片段。不同類型的細胞具有獨特的甲基化模式。康奈爾大學(xué)Iwijn課題組致力于器官移植損傷監(jiān)測研究，通過血液等體液中cfDNA的全基因組測序（WGBS），結(jié)合cfDNA的甲基化分析，監(jiān)測移植后器官損傷、感染以及癌癥復(fù)發(fā)情況。cfDNA能提前發(fā)現(xiàn)器官損傷跡象，為治療爭取寶貴時間與選擇。
以下內(nèi)容基于該課題組在造血干細胞移植中的策略驗證工作，于2022年在《PNAS》上發(fā)表的《Cell-free DNA profiling informs all major complications of hematopoietic cell transplantation》。實驗設(shè)計如下：
理論依據(jù)：在移植前(pre-conditioning)、移植前(pre-infusion)、移植后(engraftment)以及移植后1、2、3、6個月定期采集血樣，并在病情進展時額外采集。總共獲得170份樣本。25名癌癥患者中有20人使用panel測序確定癌癥突變特征，14名患者出現(xiàn)移植物對抗宿主病(GVHD)，6名患者出現(xiàn)造血細胞嵌合，7名患者復(fù)發(fā)，7名患者發(fā)生BK病毒感染。
從0.5-1.9mL血漿中分離cfDNA，使用亞硫酸鹽全基因組測序(WGBS)，平均測序量為39±14M reads，基因組深度為0.96±0.4x。
監(jiān)測移植物抗宿主病：基于臨床活檢，GVHD+患者的實體器官cfDNA在移植1個月后顯著高于對照組，預(yù)測能力(AUC)為0.88、0.95、0.96。皮膚性GVHD患者與GVHD-患者皮膚來源cfDNA比例存在顯著差異，損傷程度高的患者皮膚cfDNA量更多。肝或消化道損傷患者數(shù)量不足，無法進行統(tǒng)計分析。
監(jiān)控血漿病毒組：取未比對到宿主基因組上的reads，比對到微生物數(shù)據(jù)庫分析，并應(yīng)用自研的背景校正算法去除噪聲和環(huán)境污染。移植后樣本中檢測出較高病毒豐度，主要是Anelloviridae科。26名患者100份樣本檢測到皰疹病毒和多瘤病毒。cfDNA靈敏度為0.89，特異性為0.98。對于4個PCR陰性但cfDNA陽性的樣本，其中1個無血液PCR結(jié)果，另外3個樣本來源的患者后續(xù)在尿液中檢測出病毒。
監(jiān)測癌癥復(fù)發(fā)和移植失敗：通過癌細胞的SNP等其他突變信息監(jiān)測癌癥復(fù)發(fā)。20名癌癥患者在移植前使用高深度panel檢測過其癌癥突變特征，確定6名患者有染色體結(jié)構(gòu)變異(SV)，監(jiān)測腫瘤cfDNA信號。患者031在移植后檢測到腫瘤亞克隆群體擴增，發(fā)現(xiàn)新突變，移植前比例為90%，移植后23%，6個月后上升至79%。隨后骨髓活檢確診白血病。患者003發(fā)生嚴重GVHD，實體組織來源的cfDNA和腫瘤來源的cfDNA一起增加，可能指示GVHD合并腫瘤逃逸。
討論：研究證實了cfDNA+甲基化監(jiān)測在造血干細胞移植后器官損傷、感染、癌癥復(fù)發(fā)以及移植失敗中的概念性應(yīng)用。實體器官cfDNA量在移植后1個月預(yù)測GVHD的能力顯著。與蛋白損傷標志物相比，cfDNA+甲基化技術(shù)具有通用性，能夠測量任何組織損傷，而蛋白損傷標志物往往局限于特定損傷部位。此外，組織特異性cfDNA濃度與損傷程度直接相關(guān)。
盡管研究基于27例患者，需擴大樣本量驗證其他部位器官損傷，并評估該方法在檢測和診斷慢性GVHD中的作用。進一步解析cfDNA中免疫細胞信號，區(qū)分抗體介導(dǎo)和T細胞介導(dǎo)的排斥反應(yīng)，將提升監(jiān)測策略的精準性。上述研究僅用于科學(xué)研究，不包含醫(yī)療建議。詳細信息見：doi.org/10.1073/pnas.21...
龍黨18798798042： 想了解地中海貧血是怎樣患的? - 中醫(yī)科 - 復(fù)禾健康問答
于都縣偏心： ______ 你是貧血, 臨床觀察表明,許多貧血患者,血紅蛋白低下是由于身體內(nèi)某一造血原料不足引起的.只要根據(jù)不同類型的貧血,補充相應(yīng)的造血原料,貧血就能糾正.而補充原料,大部分患者只要注意飲食就能辦到. (1)缺鐵性貧血.需補充含鐵豐...
龍黨18798798042： 室內(nèi)環(huán)境檢測治理怎么做呢?到底該怎么辦好呢? -
于都縣偏心： ______ 室內(nèi)環(huán)境檢測治理怎么做呢?到底該怎么辦好呢?!!...../裝修在使居室變得舒適與美觀的同時,也給室內(nèi)環(huán)境造成了污染,目前,市場上流行的竹碳、活性炭等多種室內(nèi)空氣污染清除方法.不過,我個人覺得,這些單一的使用活性炭等吸附、遮蓋,是治標不治本的.要想徹底清除室內(nèi)污染,還應(yīng)該找專業(yè)處理室內(nèi)污染的公司、機構(gòu)來做施工.向北京“原生鈦”,是一家技術(shù)、產(chǎn)品都很精良并且很負責(zé)任的公司,您可以上網(wǎng)搜索一下,關(guān)于這家公司的案例很多,有很高的好評度.
龍黨18798798042： 細胞分裂間期分有哪些階段?%CF%B8%B0%FB%B7%D6%C1%D1%BC%E4%C6%DA%B7%D6%D3%D0%C4%C4%D0%A9%BD%D7%B6%CE%A3%... -
于都縣偏心： ______[答案] 分有3個階段:G1期是蛋白質(zhì)和DNA合成的準備期 S期合成蛋白質(zhì)和DNA G2期仍合成蛋白質(zhì)和RNA
龍黨18798798042： 流式細胞術(shù)在血液病診斷和治療中有哪些作用?
于都縣偏心： ______ FCM通過對外周血細胞或骨髓細胞表面抗原和DNA的檢測 分析,對各種血液病的診斷、預(yù)后判斷和治療起著舉足輕重的 作用. (1)白血病的診斷和治療FCM采用各種抗血...
龍黨18798798042： 我爸說自己嘴里總發(fā)干,而且感覺很乏!會不會腎臟 - 肝病科 - 復(fù)禾健康...
于都縣偏心： ______ 一般在前幾次注射后,會出現(xiàn)明顯的感冒癥狀,如頭疼,全身疼等.通常幾次以后可自然消失.在注射一周左右,應(yīng)檢查白血球等血向指標,如果人在可接受范圍之內(nèi),可繼續(xù)用藥,如果白血球下降較多,應(yīng)詢...
細胞外游離DNA(cfDNA)是人體細胞、微生物等死亡后釋放到體液中的DNA片段。不同類型的細胞具有獨特的甲基化模式。康奈爾大學(xué)Iwijn課題組致力于器官移植損傷監(jiān)測研究，通過血液等體液中cfDNA的全基因組測序（WGBS），結(jié)合cfDNA的甲基化分析，監(jiān)測移植后器官損傷、感染以及癌癥復(fù)發(fā)情況。cfDNA能提前發(fā)現(xiàn)器官損傷跡象，為治療爭取寶貴時間與選擇。
以下內(nèi)容基于該課題組在造血干細胞移植中的策略驗證工作，于2022年在《PNAS》上發(fā)表的《Cell-free DNA profiling informs all major complications of hematopoietic cell transplantation》。實驗設(shè)計如下：
理論依據(jù)：在移植前(pre-conditioning)、移植前(pre-infusion)、移植后(engraftment)以及移植后1、2、3、6個月定期采集血樣，并在病情進展時額外采集。總共獲得170份樣本。25名癌癥患者中有20人使用panel測序確定癌癥突變特征，14名患者出現(xiàn)移植物對抗宿主病(GVHD)，6名患者出現(xiàn)造血細胞嵌合，7名患者復(fù)發(fā)，7名患者發(fā)生BK病毒感染。
從0.5-1.9mL血漿中分離cfDNA，使用亞硫酸鹽全基因組測序(WGBS)，平均測序量為39±14M reads，基因組深度為0.96±0.4x。
監(jiān)測移植物抗宿主病：基于臨床活檢，GVHD+患者的實體器官cfDNA在移植1個月后顯著高于對照組，預(yù)測能力(AUC)為0.88、0.95、0.96。皮膚性GVHD患者與GVHD-患者皮膚來源cfDNA比例存在顯著差異，損傷程度高的患者皮膚cfDNA量更多。肝或消化道損傷患者數(shù)量不足，無法進行統(tǒng)計分析。
監(jiān)控血漿病毒組：取未比對到宿主基因組上的reads，比對到微生物數(shù)據(jù)庫分析，并應(yīng)用自研的背景校正算法去除噪聲和環(huán)境污染。移植后樣本中檢測出較高病毒豐度，主要是Anelloviridae科。26名患者100份樣本檢測到皰疹病毒和多瘤病毒。cfDNA靈敏度為0.89，特異性為0.98。對于4個PCR陰性但cfDNA陽性的樣本，其中1個無血液PCR結(jié)果，另外3個樣本來源的患者后續(xù)在尿液中檢測出病毒。
監(jiān)測癌癥復(fù)發(fā)和移植失敗：通過癌細胞的SNP等其他突變信息監(jiān)測癌癥復(fù)發(fā)。20名癌癥患者在移植前使用高深度panel檢測過其癌癥突變特征，確定6名患者有染色體結(jié)構(gòu)變異(SV)，監(jiān)測腫瘤cfDNA信號。患者031在移植后檢測到腫瘤亞克隆群體擴增，發(fā)現(xiàn)新突變，移植前比例為90%，移植后23%，6個月后上升至79%。隨后骨髓活檢確診白血病。患者003發(fā)生嚴重GVHD，實體組織來源的cfDNA和腫瘤來源的cfDNA一起增加，可能指示GVHD合并腫瘤逃逸。
討論：研究證實了cfDNA+甲基化監(jiān)測在造血干細胞移植后器官損傷、感染、癌癥復(fù)發(fā)以及移植失敗中的概念性應(yīng)用。實體器官cfDNA量在移植后1個月預(yù)測GVHD的能力顯著。與蛋白損傷標志物相比，cfDNA+甲基化技術(shù)具有通用性，能夠測量任何組織損傷，而蛋白損傷標志物往往局限于特定損傷部位。此外，組織特異性cfDNA濃度與損傷程度直接相關(guān)。
盡管研究基于27例患者，需擴大樣本量驗證其他部位器官損傷，并評估該方法在檢測和診斷慢性GVHD中的作用。進一步解析cfDNA中免疫細胞信號，區(qū)分抗體介導(dǎo)和T細胞介導(dǎo)的排斥反應(yīng)，將提升監(jiān)測策略的精準性。上述研究僅用于科學(xué)研究，不包含醫(yī)療建議。詳細信息見：doi.org/10.1073/pnas.21...
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于都縣偏心： ______ 室內(nèi)環(huán)境檢測治理怎么做呢?到底該怎么辦好呢?!!...../裝修在使居室變得舒適與美觀的同時,也給室內(nèi)環(huán)境造成了污染,目前,市場上流行的竹碳、活性炭等多種室內(nèi)空氣污染清除方法.不過,我個人覺得,這些單一的使用活性炭等吸附、遮蓋,是治標不治本的.要想徹底清除室內(nèi)污染,還應(yīng)該找專業(yè)處理室內(nèi)污染的公司、機構(gòu)來做施工.向北京“原生鈦”,是一家技術(shù)、產(chǎn)品都很精良并且很負責(zé)任的公司,您可以上網(wǎng)搜索一下,關(guān)于這家公司的案例很多,有很高的好評度.
于都縣偏心： ______[答案] 分有3個階段:G1期是蛋白質(zhì)和DNA合成的準備期 S期合成蛋白質(zhì)和DNA G2期仍合成蛋白質(zhì)和RNA
于都縣偏心： ______ FCM通過對外周血細胞或骨髓細胞表面抗原和DNA的檢測 分析,對各種血液病的診斷、預(yù)后判斷和治療起著舉足輕重的 作用. (1)白血病的診斷和治療FCM采用各種抗血...
于都縣偏心： ______ 一般在前幾次注射后,會出現(xiàn)明顯的感冒癥狀,如頭疼,全身疼等.通常幾次以后可自然消失.在注射一周左右,應(yīng)檢查白血球等血向指標,如果人在可接受范圍之內(nèi),可繼續(xù)用藥,如果白血球下降較多,應(yīng)詢...
