維生素D測定法簡介
目錄
- 1 拼音
- 1.1 第一法
- 1.2 第二法
- 1.3 第三法
1 拼音
wéi shēng sù D cè dìng fǎ
本法系用高效液相色譜法測定維生素D(包括維生素D<[2]>和D<[3]>,下同)及其制劑、維生素AD制劑或魚肝油中所含維生素D及前維生素D經(jīng)折算成維生素D的總量，以單位表示，每單位相當(dāng)于維生素D0.025μg。
測定應(yīng)在半暗室中及避免氧化的情況下進(jìn)行。
無維生素A醇及其他雜質(zhì)干擾的供試品可用第一法測定，否則應(yīng)按第二法處理后測 定；如果按第二法處理后，前維生素D峰仍受雜質(zhì)干擾，僅有維生素D峰可以分離時，則應(yīng)按第三法測定。
1.1 第一法
對照品貯備溶液的制備
根據(jù)各制劑中所含維生素D的成分,精密稱取相應(yīng)的維生素D<[2]>或D<[3]>對照品25mg,置100ml棕色量瓶中，加異辛烷80ml，避免加熱，用超聲處理助溶1分鐘使完全溶解，加異辛烷至刻度，搖勻，充氮密塞，避光，0℃以下保存。
測定維生素D<[2]>時，應(yīng)另取維生素D<[3]>對照品25mg，同法制成維生素D<[3]>對照品貯備溶液，供系統(tǒng)適用性試驗用。
內(nèi)標(biāo)溶液的制備
稱取鄰苯二甲酸二甲酯25mg，置25ml量瓶中，加正己烷至刻度，搖勻。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗
用硅膠為填充劑，正己烷－正戊醇（997∶3）為流動相，檢測波長為254nm。量取維生素D<[3]>對照品貯備溶液5ml，置具塞玻璃容器中，通氮后密塞，置90℃水浴中加熱1小時，取出迅速冷卻，加正己烷5ml， 搖勻，置1cm具塞石英吸收池中，在2支8W主波長分別為254和365nm的紫外光燈下， 將石英吸收池斜放成45°,并距燈管5～6cm,照射5分鐘,使溶液中含有前維生素D<[3]>、反式維生素D<[3]>、維生素D<[3]>和速甾醇D<[3]>；取此溶液注入液相色譜儀，測定維生素D<[3]>的峰值，先后進(jìn)樣5次,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0％；前維生素D<[3]>(與維生素D<[3]>的比保留時間約為0.5)與反式維生素D<[3]>(與維生素D<[3]>的比保留時間約為 0.6)以及維生素D<[3]>與速甾醇D<[3]>(與維生素D<[3]>的比保留時間約為1.1)的峰分離度均應(yīng)大于1.0。
校正因子測定
精密量取對照品貯備溶液和內(nèi)標(biāo)溶液各5ml,置50ml量瓶中，加正己烷至刻度，搖勻；取一定量注入液相色譜儀，計算維生素D的校正因子f<[1]>。
另精密量取對照品貯備溶液5ml置50ml量瓶中，加入2,6－二叔丁基對甲酚結(jié)晶1粒,通氮排除空氣后，密塞，置90℃水浴中加熱1．5小時，取出迅速冷卻至室溫，精密加內(nèi)標(biāo)溶液5ml，加正己烷至刻度，搖勻；取一定量注入液相色譜儀，計算前維生素D折算成維生素D的校正因子f<[2]>。
f<[2]>＝(A<[s]>·m<[r]>－f<[1]>m<[s]>A<[r1]>)／A<[r2]>·m<[s]>
式中
A<[s]>為內(nèi)標(biāo)的峰值；
m<[r]>為加入對照品的量；
f<[1]>為維生素D的校正因子；
m<[s]>為加入內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的量；
A<[r1]>為維生素D的峰值；
A<[r2]>為前維生素D的峰值。
含量測定
取各該制劑項下制備的供試品溶液進(jìn)行測定,按下列公式計算維生素D及前維生素D折算成維生素D的總量。
mi＝(f<[1]>·A<[i1]>＋f<[2]>A<[i2]>)·m<[s]>／A<[s]>
式中
A<[i1]>為維生素D的峰值；
A<[i2]>為前維生素D的峰值；
m<[s]>為加入內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的量；
A<[s]>為內(nèi)標(biāo)的峰值。
1.2 第二法
精密稱取供試品適量(相當(dāng)于維生素D總量600單位以上，重量不超過2.0g)，置皂化瓶中，加乙醇30ml、抗壞血酸0.2g與50％(g／g)氫氧化鉀溶液3ml[若供試量為3g，則加50％(g／g)氫氧化鉀溶液4ml]，置水浴上加熱回流30分鐘，冷卻后，自冷凝管頂端加水10ml沖洗冷凝管內(nèi)壁，將皂化液移至分液漏斗中，皂化瓶用水60～100ml分?jǐn)?shù)次洗滌,洗液并入分液漏斗中，用不含過氧化物的乙醚振搖提取3次，第一次60ml,以后每次40ml，合并乙醚液，用水洗滌數(shù)次，每次約100ml，洗滌時應(yīng)緩緩旋動，避免乳化,直至水層遇酚酞指示液不再顯紅色，靜置，分取乙醚提取液，加入干燥濾紙條少許振搖除去乙醚提取液中殘留的水分，分液漏斗及濾紙條再用少量乙醚洗滌，洗液與提取液合并，置具塞圓底燒瓶中，在水浴上低溫蒸發(fā)至約5ml，再用氮?dú)饬鞔蹈桑杆倬芗尤爰状?ml，密塞，超聲處理助溶后，移入離心管中，離心，取上清液作為供試品溶液A。
凈化用色譜柱系統(tǒng)分離收集維生素D
精密量取上述供試品溶液A 500μl,注入以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的液相色譜柱，以甲醇－乙腈－水(50∶50∶2) 為流動相進(jìn)行分離，檢測波長為254nm，從計錄儀上觀察色譜圖，要求維生素D與前維生素D為疊 峰，并能與維生素A及其他干擾含量測定的雜質(zhì)分開；準(zhǔn)確收集含有維生素D及前維生素D混合物的全部流出液，置具塞圓底燒瓶中，用氮?dú)饬餮杆俅蹈?精密加入已知內(nèi)標(biāo)濃度的正己烷溶液適量(不少于2ml，并使每1ml中含維生素D為50～140單位,內(nèi)標(biāo)物質(zhì)與維生素D的重量比約為4∶1)，密塞，超聲處理助溶，即為供試品溶液B。
取供試品溶液B，按第一法進(jìn)行含量測定，進(jìn)樣量為100～200μl。
1.3 第三法
供試品溶液的制備
取各該制劑項下制備的供試品溶液A,按上述第二法凈化用色譜柱系統(tǒng)分離維生素D項下的方法處理,至“用氮?dú)饬餮杆俅蹈伞焙? 加入異辛烷2ml溶解,通氮排除空氣后，密塞，置90℃水浴中，加熱1.5小時后，立即通氮在2分鐘內(nèi)吹干，迅速精密加入正己烷2ml，溶解后，即為供試品溶液C。
對照品溶液的制備
精密量取對照品貯備溶液適量,加異辛烷定量稀釋制成每1ml中約含維生素D 50單位，精密量取2ml置具塞圓底燒瓶中，照供試品溶液制備項下的方法,自“通氮排除空氣后”起，依法操作，得對照品溶液。
含量測定
維生素D測定法簡介
本法系用高效液相色譜法測定維生素D(包括維生素D<[2]>和D<[3]>,下同)及其制劑、維生素AD制劑或魚肝油中所含維生素D及前維生素D經(jīng)折算成維生素D的總量，以單位表示，每單位相當(dāng)于維生素D0.025μg。測定應(yīng)在半暗室中及避免氧化的情況下進(jìn)行。無維生素A醇及其他雜質(zhì)干擾的供試品可用第一法測定，否則...
食品中維生素d 測定
m--稱樣量，含量，IU∕100g；ρs --進(jìn)樣液中維生素D有濃度，mg\/mL；A s --進(jìn)樣液中維生素D有峰高（或峰面積）；A s d --標(biāo)樣液中維生素D有峰高（或峰面積）；ρsd --標(biāo)樣中維生素D的濃度；計算結(jié)果精確至小數(shù)點(diǎn)后一位。7. 注意事項 1) 允許誤差及最小檢出量：同一樣品的2次測定值...
25-羥基維生素D測定是檢查什么的
25-羥基維生素D可檢查人體是否缺乏維生素D，是否缺乏維生素D主要金標(biāo)準(zhǔn)是檢測血液25-羥基維生素D濃度。如果低于30ng\/dl，常定義為維生素D不足。如果低于20ng\/dl，常定義為維生素D缺乏。如果低于10ng\/dl，多定義為維生素D嚴(yán)重缺乏。實(shí)際人體合成維生素D主要靠皮膚合成，由于現(xiàn)代人在戶外活動時間比較短，也很...
25羥維生素d測定是什么意思
25羥維生素D測定主要是用來了解人體內(nèi)維生素D的儲存水平，維生素D缺乏與許多疾病有關(guān)，如小兒比較常見的維生素D缺乏性佝僂病、骨軟化癥，老年人尤其是絕經(jīng)后婦女，與骨外傷病人容易多發(fā)的成人骨質(zhì)疏松癥以及腎性骨病等。25羥維生素D測定可用于上述疾病的診斷、鑒別與治療效果的監(jiān)測，25羥維生素D測定還可用于...
25羥維生素d測定是什么
25羥維生素d測定是通過檢查測驗測量血液中的25羥維生素能夠反映身體中所含有的維生素D含量是多少，可以定期的到醫(yī)院去做測定。25羥維生素是維生素d在人體中的一種表現(xiàn)形式，是由于維生素d在人體中在吸收之后演變成的一種物質(zhì)，是一種脂溶性的維生素，主要是通過太陽光線照射受到紫外線照射之后合成的維生素，...
25羥維生素D測定是什么
因此25羥維生素D是維生素在體內(nèi)的代謝過程中一種主要的存在形式。通過測定血清25羥維生素D的高低，可以反映人體內(nèi)維生素D的高低水平，這個數(shù)值的高低可以幫助判斷是否有與維生素D缺乏相關(guān)的疾病。如果25羥維生素D數(shù)值偏低的話，提示可能有佝僂病、骨軟化癥，或者是絕經(jīng)后女性的骨質(zhì)疏松等疾病。
25羥維生素d化學(xué)發(fā)光法是什么意思
化學(xué)發(fā)光法是一種基于光化學(xué)反應(yīng)的測量方法。在25羥維生素D化學(xué)發(fā)光法中，通常使用一種特定的化學(xué)發(fā)光試劑或試劑盒，其中包含熒光標(biāo)記的抗體或探針。這些試劑與樣品中的25羥維生素D結(jié)合，形成特定的復(fù)合物。 通過激發(fā)和發(fā)射光的相互作用，測量儀器可以檢測到復(fù)合物中發(fā)光的強(qiáng)度或熒光信號。熒光信號的強(qiáng)度與...
25-羥維生素D測定是什么
25-羥維生素D是監(jiān)測血液中維生素D的水平，雙羥的維生素D濃度在體內(nèi)非常不恒定，半衰期非常短，很難反映血中維生素D的濃度。而25-羥維生素D的濃度在血液中比較恒定，通過監(jiān)測25-羥維生素D的水平可以充分反映血液中D的水平是否恒定、是否存在維生素D的缺乏。25-羥維生素D的正常值不低于30ng\/L，當(dāng)25-羥...
25羥維生素d測定是什么
25羥維生素D是維生素D代謝的一個中間產(chǎn)物，測定這個主要是看維生素D的水平。維生素D對肌肉骨骼的健康非常重要，可以促進(jìn)腸道鈣的吸收，使新生的骨組織礦化，同時在肌肉功能中也起非常重要的作用。如果要是成人維生素D缺乏，就可以出現(xiàn)軟骨病，如果要是兒童發(fā)生維生素D缺乏，就是佝僂病，所以一定要注重維生素D...
血清維生素測定是什么
血清維生素測定，在臨床上常見的是維生素B12、維生素D的測定。通過血液檢查，幫助了解體內(nèi)兩種維生素的含量是否在正常值范圍。維生素B12是人體血細(xì)胞造血所必需，是人體血細(xì)胞的細(xì)胞核形成的重要原料。當(dāng)維生素B12缺乏時，可以觀察到患者白細(xì)胞計數(shù)下降，說明白細(xì)胞合成會受到影響，紅細(xì)胞體積會變得非常大，出現(xiàn)...
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