有哪些因素會影響到電泳圖譜上DNA條帶的位置?
1、 DNA的分子大小:
線狀雙鏈DNA分子在一定濃度瓊脂糖凝膠中的遷移速率與DNA分子量對數(shù)成反比,分子越大則所受阻力越大,遷移得越慢.
2、 瓊脂糖濃度
一個給定大小的線狀DNA分子,其遷移速度在不同濃度的瓊脂糖凝膠中各不相同.分離小于0.5kb的DNA片段所需膠濃度是 1.2-1.5%,分離大于10kb的DNA分子所需膠濃度為0.3-0.7%,DNA片段大小間于兩者之間則所需膠濃度為0.8-1.0%.
3、 DNA分子的構(gòu)象
相同分子量的線狀、開環(huán)和超螺旋DNA在瓊脂糖凝膠中移動速度是不一樣的,超螺旋DNA移動最快,而線狀雙鏈DNA移動最慢.
4、 電源電壓
在低電壓時,線狀DNA片段的遷移速率與所加電壓成正比.但是隨著電場強(qiáng)度的增加,不同分子量的DNA片段的遷移率將以不同的幅度增長,片段越大,因場強(qiáng)升高引起的遷移率升高幅度也越大,因此電壓增加,瓊脂糖凝膠的有效分離范圍將縮小.要使大于2kb的DNA片段的分辨率達(dá)到最大,所加電壓不得超過5v/cm.
5、嵌入染料的存在
熒光染料溴化乙啶用于檢測瓊脂糖凝膠中的DNA,染料會嵌入到堆積的堿基對之間并拉長線狀和帶缺口的環(huán)狀DNA,使其剛性更強(qiáng),還會使線狀DNA遷移率降低 15％.
6、 離子強(qiáng)度影響
電泳緩沖液的組成及其離子強(qiáng)度影響DNA的電泳遷移率.在沒有離子存在時(如誤用蒸餾水配制凝膠),電導(dǎo)率最小,DNA幾乎不移動,在高離子強(qiáng)度的緩沖液中(如誤加10×電泳緩沖液),則電導(dǎo)很高并明顯產(chǎn)熱,嚴(yán)重時會引起凝膠熔化或DNA變性.
有哪些因素會影響到電泳圖譜上DNA條帶的位置?
6、 離子強(qiáng)度影響 電泳緩沖液的組成及其離子強(qiáng)度影響DNA的電泳遷移率.在沒有離子存在時(如誤用蒸餾水配制凝膠),電導(dǎo)率最小,DNA幾乎不移動,在高離子強(qiáng)度的緩沖液中(如誤加10×電泳緩沖液),則電導(dǎo)很高并明顯產(chǎn)熱,嚴(yán)重時會引起凝膠熔化或DNA變性.
PCR后進(jìn)行DNA電泳跑的條帶是一條,但不是我想要的條帶,是怎么回事啊?
1. 引物設(shè)計不當(dāng)，可能與你的目標(biāo)DNA擴(kuò)增所需引物不符。2. DNA回收和純化過程中可能存在技術(shù)問題，導(dǎo)致非目標(biāo)DNA片段的引入。3. PCR反應(yīng)體系中的鎂離子濃度不合適，可能影響了引物的結(jié)合和延伸。建議你逐一檢查上述可能的原因，并進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整和優(yōu)化。例如，重新設(shè)計引物，確保它們能夠特異性地擴(kuò)增你的...
dna電泳條帶圖的解讀
在DNA電泳中，DNA片段會根據(jù)其大小在凝膠中移動，較大的DNA片段移動較慢，而較小的片段移動較快。因此，通過觀察條帶的位置，我們可以大致估計DNA片段的大小。例如，如果一個DNA樣本在電泳圖中的位置靠近凝膠的底部，說明這個DNA片段較大；反之，如果條帶位置靠近凝膠頂部，則表示片段較小。其次，條帶的...
123bp的基因,瓊脂糖凝膠電泳的條帶怎么小于100bp?
電泳電壓與遷移行為：電泳電壓過高時，DNA片段在凝膠中的遷移速度會加快，這可能導(dǎo)致小片段的過度遷移，甚至導(dǎo)致小片段“跑丟”，從而在預(yù)期位置觀察不到明顯條帶，而在更小的位置出現(xiàn)異常條帶。瓊脂糖濃度的影響：瓊脂糖濃度對DNA片段的分辨能力有較大影響。較高濃度的瓊脂糖（如2.0%或以上）適用于分...
dna電泳條帶怎么看?
1. 條帶數(shù)量：觀察DNA電泳條帶時，條帶的數(shù)量能夠提供DNA拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的信息。例如，質(zhì)粒DNA通常在電泳上顯示為一到三條帶，這代表了不同的拓?fù)洚悩?gòu)體。如果出現(xiàn)多條帶，可能是由于DNA的降解或污染。2. 條帶位置：條帶在電泳膠中的位置揭示了DNA的分子量信息。條帶靠近陰極（負(fù)極）通常表示分子量較小，...
提了DNA之后電泳看不到條帶,求助!
1 點樣空有沒有東西？可能有蛋白污染，所以都堵在點樣空，你看到的白色沉淀可能就是蛋白含量太高。2 操作太劇烈，活有DNase 污染，DNA都降解成小片段，跑出膠。你為什么要溶解DNA這么長的時間？是吹得太很了嗎？一般不超過30min（我一般槍吸一下，吹5min），不然不好溶。溶解5-10min已經(jīng)足夠了...
凝膠電泳中條帶的位置和其寬度和顏色深淺有什么關(guān)系嗎?
（1）瓊脂糖 ( Agarose ) 是一種線性多糖聚合物 , 系從紅色海藻產(chǎn)物瓊脂中提取而來的。當(dāng)瓊脂糖溶液加熱到沸點后冷卻凝固便會形成良好的電泳介質(zhì) , 其密度是由瓊脂糖的濃度決定的。經(jīng)過化學(xué)修飾的低熔點 (LMP) 的瓊脂糖 , 在結(jié)構(gòu)上比較脆弱 , 因此在較低的溫度下便會熔化, 可用于DNA片段的制備...
PCR后進(jìn)行DNA電泳跑的條帶是一條,但不是我想要的條帶,是怎么回事啊?
你的結(jié)果上的“一條帶”位置在哪里？我想你能確定不是目的帶的話，那應(yīng)該結(jié)果顯示的條帶比較靠前，DNA長度較小。那很有可能是引物二聚體。出現(xiàn)這個情況，可能的原因有3：1。引物本身不對，不是目的DNA擴(kuò)增需要的引物。2。DNA回收提純的問題 3。PCR體系內(nèi)鎂離子濃度問題。。。建議排查下各項。
...跑電泳結(jié)果沒有條帶,連Marker都很模糊是什么原因?
染料的問題或是量不足可能是導(dǎo)致電泳結(jié)果沒有條帶，連Marker都顯得模糊的原因。染料在電泳中扮演著重要的角色，它不僅幫助我們觀察條帶，還能增強(qiáng)條帶的可見性。如果染料本身有問題，例如過期或質(zhì)量不佳，就可能影響到條帶的顯現(xiàn)。此外，如果DNA樣本量過少，尤其是在進(jìn)行雙酶切之后，可能不足以產(chǎn)生明顯...
DNA酶切反應(yīng)不徹底電泳圖譜是怎樣的
另外，DNA降解同樣會導(dǎo)致電泳圖譜出現(xiàn)異常。當(dāng)DNA分子受到降解作用，原本的長片段會被分解成多個較短的片段。這些較短的片段在電泳過程中會分布于不同的位置，形成所謂的Ladder樣改變。此外，DNA降解還會導(dǎo)致圖譜上出現(xiàn)涂抹帶，即電泳圖譜上顯示出一片模糊的帶狀區(qū)域，沒有明顯的片段分離。這些異常電泳圖譜的...
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中山區(qū)剛輪： ______ 原發(fā)布者:霸王天下無悔 電泳主要影響因素1、電壓電壓由樹脂本身的結(jié)構(gòu)決定,不同產(chǎn)品都有一個不同的操作范圍,在此范圍內(nèi),如果電壓過低,漆膜會變薄,泳透率會降低,工件內(nèi)腔及夾縫處漆膜會很薄,甚至上不了漆,嚴(yán)重影響漆膜的性...
中山區(qū)剛輪： ______ 瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂糖作支持介質(zhì)的一種電泳方法.其分析原理與其他支持物電泳的最主要區(qū)別是:它兼有“分子篩”和“電泳”的雙重作用.瓊脂糖凝膠具有網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),物質(zhì)分子通過時會受到阻力,大分子物質(zhì)在涌動時受到的阻力大,因此在凝膠電泳中,帶電顆粒的分離不僅取決于凈電荷的性質(zhì)和數(shù)量,而且還取決于分子大小,這就大大提高了分辨能力.DNA分子在高于等電點的pH溶液中帶負(fù)電荷,因此在電場中向正極移動. 影響因素的話,DNA的長度,結(jié)構(gòu),膠的濃度,電壓等會對電泳造成影響.
中山區(qū)剛輪： ______[答案] 醋酸纖維薄膜電泳實驗我們剛剛做過,聽老師說,要想使電泳圖譜清晰,緩沖液的濃度要控制在適當(dāng)范圍,點樣要均勻,動作要迅速.其余的我也記不清楚了.
中山區(qū)剛輪： ______ 膠體中有雜質(zhì).
中山區(qū)剛輪： ______ 對樣品無吸附現(xiàn)象;具有多孔立體結(jié)構(gòu);載體不帶可解離的基團(tuán)
中山區(qū)剛輪： ______[答案] 人體中含有的各種血清蛋白執(zhí)行著許多特殊的功能.在各種疾病期間總血清蛋白濃度和各蛋白質(zhì)組分的比例可發(fā)生變化,因此,血清蛋白質(zhì)和各蛋白質(zhì)組分的定量在臨床診斷和治療上有很重的價值[1].“血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳”實驗因而是《生物...
中山區(qū)剛輪： ______ 一般臨床上應(yīng)用的分為對流電泳,(包括對流免疫電泳),擴(kuò)散法電泳方試方法各自差不多,影響電泳結(jié)果的因素很多,基本以時間,溫度,PH,介質(zhì),電流,電壓為主導(dǎo)影響因素
中山區(qū)剛輪： ______ 一.板材自身 粗糙度 氧化皮二.前處理 防銹油和雜質(zhì)是否完全除去 磷化膜的質(zhì)量是否達(dá)標(biāo) 磷化后掛灰與否三.電泳的情況比較多 電壓的高低 電泳漆的固體份等等,要了解需要好好看下相關(guān)的資料四.烘爐的有效溫度五.電泳出問題一般根據(jù)不同的表觀進(jìn)行分析.行業(yè)內(nèi)有一句話.電泳出問題90%出在前處理,前處理的問題90%出在脫脂.以下是和前處理有關(guān)的電泳問題對應(yīng)點介紹:縮孔------脫脂不干凈少量橘皮或者電泳漆膜脫落-----表調(diào)失效顆粒嚴(yán)重-----磷化掛灰或生產(chǎn)線密閉問題留痕嚴(yán)重-----前處理水污染度還有很多,但是以上幾點比較有代表性.但不是絕對的原因.具體問題具體分析
中山區(qū)剛輪： ______[答案] 影響電泳泳動度的因素:1、顆粒性質(zhì):顆粒的直徑、形狀及所帶靜電荷量對泳動速度有較大影響.一般來說顆粒帶凈電荷量越多,或其形狀越接近球形,在電場中的泳動速度就越快.反之則越慢.2、電場強(qiáng)度:電場強(qiáng)度是指每一厘...
中山區(qū)剛輪： ______ 1、DNA的分子大小及構(gòu)型 不同構(gòu)型DNA的移動速度次序為:供價閉環(huán)DNA(covalently closed circular,cccDNA)>直線DNA>開環(huán)的雙鏈環(huán)狀DNA.線狀雙鏈DNA分子在一定濃度瓊脂糖凝膠中的遷移速率與DNA分子量對數(shù)成反比,分子越大則所...
