瓊脂糖凝膠電泳實驗步驟
第一步：安裝電泳管。選擇合格的凝膠電泳管，確保管內(nèi)聚含均勻、無氣泡、無裂縫且膠面平整并與管壁緊密結(jié)合，插入電極槽底板的圓孔中，留出1/5部分位于底板上方，以確保管與底板垂直，密封處無滲漏現(xiàn)象。
第二步：加樣。根據(jù)樣品性質(zhì)選擇合適的加樣方法。對于液態(tài)樣品，可溶于特定濃度的蔗糖或甘油中，然后加在濃縮膠表面。對于固體樣品，應(yīng)先溶在濃縮膠緩沖液中，并加入適量的高濃度蔗糖溶液以增大樣品比重，之后加在膠面上。樣品體積一般不超過100微升，常用量在20-50微升之間，且含量不超過100微克。對于多組分混合物，加樣量可適當(dāng)增加至200微克。如果樣品為提取液，需去除有形顆粒，只取可溶部分上樣，并確保樣品溶液具有低電導(dǎo)性，鹽濃度不超過0.05摩爾/升。
第三步：加電極緩沖液。在上下電極槽中填充緩沖液，確保與電泳溫度一致。操作時應(yīng)小心，避免攪動樣品溶液及在電泳管上下口形成氣泡。緩沖液的用量根據(jù)容器大小而異，一般情況下，電泳管至少有3/5浸入緩沖液。
第四步：加指示染料。選擇合適的指示染料，如漠酚藍、甲基綠或甲烯藍，用于檢測電泳過程中的分離區(qū)帶。常用方法是在上電極槽緩沖液中加入指示染料，或配制0.1%濃度的染料溶液，每管加入5微升，與樣品溶液混合后加入。用量一般為每500毫升緩沖液加1毫升指示染料。
第五步：電泳。裝配好電極，接通直流電源。對于直徑5-7毫米的凝膠，初始電流設(shè)置為1毫安/管，逐漸增加至2-5毫安/管（10分鐘后）。通常情況下，5毫米x65毫米的凝膠在20攝氏度時使用4毫安/管進行電泳，大約需要40分鐘。在電泳過程中，電流需保持穩(wěn)定，若電流過大產(chǎn)生過高歐姆熱影響某些樣品，可適當(dāng)降低電流并延長電泳時間。
為了保持緩沖液的穩(wěn)定緩沖能力，長時間電泳時可采用循環(huán)緩沖液的方法。上下電極槽的緩沖液水平保持恒定，通過輸液器將下槽的緩沖液一滴一滴滴入上槽，當(dāng)上槽緩沖液增加時，通過溢流管滴回到下槽，以維持緩沖液水平的恒定。滴入上槽的緩沖液應(yīng)避免連續(xù)滴入，以保持穩(wěn)定。
凝膠的取出：電泳完成后，取出電泳管。使用配制有細長針頭的注射器小心地將針頭插入凝膠和玻璃管壁之間，邊插入邊轉(zhuǎn)動管子，同時加入適量水，另一端同樣處理。之后，將管套上橡皮管，用自來水壓力壓出凝膠，或用洗耳球擠壓。若壓出凝膠困難，可將注射器內(nèi)填充甘油代替水。也可使用金屬細絲穿過凝膠和管壁，轉(zhuǎn)動玻璃管一周后，凝膠很容易脫離管壁并被擠壓出。電泳管也可浸入甲醇中使凝膠收縮與管壁脫離，或根據(jù)具體條件采用其他方法取出凝膠，但需確保不損傷膠面，特別是低濃度大孔凝膠，其機械強度較差，取出時應(yīng)格外小心。
在凝膠的染色過程中，分離區(qū)帶的檢出至關(guān)重要。蛋白質(zhì)的染色方法通常包括固定和染色的同步進行。常用的染色方法包括氯基黑10B、考馬斯亮藍R-250、考馬斯亮藍G-250、固綠、普施安亮藍RS、硫酸銅-考馬斯亮藍混合染色液等。每種染色方法的步驟和時間不同，需要根據(jù)實驗需求選擇合適的方法。
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電泳如何制膠
1，制備1%瓊脂糖凝膠(大膠用70ml,小膠用50ml)：稱取0.7g(0.5g)瓊脂糖置于錐形瓶中，加入70ml(50ml)1×TAE，瓶口倒扣小燒杯。微波爐加熱煮沸3次至瓊脂糖全部融化，搖勻，即成1.0%瓊脂糖凝膠液。2，膠板制備：取電泳槽內(nèi)的有機玻璃內(nèi)槽(制膠槽)洗干凈，晾干，放入制膠玻璃板。取透明膠帶將...
干貨分享 | 瓊脂糖凝膠電泳的制備過程,超詳細!
第三步：蓋上電泳槽，加樣后的凝膠板立即通電進行電泳，電壓60-100V，樣品由負極(黑色)向正極(紅色)方向移動，電壓升高，瓊脂糖凝膠的有效分離范圍降低，當(dāng)溴酚藍移動到距離膠板下沿約1cm處時，停止電泳。第四步：使用凝膠成像儀拍照，觀察條帶（mark或樣品是否有條帶顯示）觀察方法：電泳時間依據(jù)實...
什么是紫色瓊脂糖凝膠電泳?
瓊脂糖凝膠電泳是實驗室常用的技術(shù)之一，廣泛運用于DNA與RNA的鑒定和分離。實驗操作較為簡單，主要步驟包括:(1)樣品準備：在核酸樣品（RNA或者DNA）中加入電泳上樣緩沖液，常用的如Gel Loading Dye, Purple (6x)，即5份樣品中加入1份緩沖液；（2）制膠：稱取1g瓊脂糖，加入100ml 的TAE(1x)或者TB...
求!!瓊脂糖凝膠電泳中凝膠的配方!!!
這一溫度對于瓊脂糖的凝固最為適宜，過低或過高都會影響凝膠的質(zhì)量。冷卻過程中，應(yīng)定期檢查溶液的溫度，確保其穩(wěn)定在50度左右。當(dāng)溶液的溫度降至所需范圍時，即可將其倒入預(yù)設(shè)好的電泳槽中。倒入凝膠時要盡量保持表面平滑，以確保電泳實驗的順利進行。此外，為了保證凝膠的穩(wěn)定性和實驗的準確性，建議使用...
瓊脂糖凝膠電泳具體操作步驟是什么?需要注意什么事項?
瓊脂糖凝膠電泳是一種常見的核酸分析技術(shù)，其操作步驟和注意事項如下：首先，選擇適當(dāng)?shù)碾娪痉椒āτ诔Ｒ?guī)檢測，瓊脂糖凝膠電泳足夠；對于高分辨率需求，聚丙烯酰胺凝膠或脈沖凝膠電泳更為適宜，需針對特定DNA片段的大小選擇合適的電泳方式。其次，凝膠濃度需根據(jù)實驗?zāi)康恼{(diào)整，0.5%至2%是常用的范圍。低濃度...
瓊脂糖凝膠電泳的操作流程
準備干凈的配膠板和電泳槽注意DNA酶污染的儀器可能會降解DNA，造成條帶信號弱、模糊甚至缺失的現(xiàn)象。 電泳洗脫法低熔點瓊脂糖凝膠電泳挖塊法凍融回收法玻璃奶回收法柱回收法 將電泳槽用ddH2O反復(fù)清洗干凈，倒入新鮮配制的滅菌電泳緩沖液；根據(jù)點樣量制備合適厚度的瓊脂糖凝膠板；切膠時盡可能切掉不含DNA...
瓊脂糖凝膠電泳分離核酸分子的實驗步驟大體有哪幾步
第三是點膠。把凝好的膠取出來放在有與制膠同濃度TBE緩沖液的電泳槽中，取每1微升Loading Dye（一種沉淀劑，使點膠后樣品沉到膠孔底部不浮上來）混勻5微升的核酸樣品。四是電泳啦！電壓電流和事件看你的樣品而定吧，一般這種小膠我們是用110V、400mA跑25min就可以了。最后當(dāng)然就是在紫外凝膠成像...
瓊脂糖凝膠電泳具體操作步驟是什么?需要注意什么事項?
一、操作步驟：1、電泳方法 一般的核酸檢測只需要瓊脂糖凝膠電泳就可以；如果需要分辨率高的電泳，特別是只有幾個bp的差別應(yīng)該選擇聚丙烯酰胺凝膠電泳；用普通電泳不合適的巨大DNA鏈應(yīng)該使用脈沖凝膠電泳。2、凝膠濃度 對于瓊脂糖凝膠電泳，濃度通常在0.5～2%之間，低濃度的用來進行大片段核酸的電泳，高濃...
瓊脂糖凝膠電泳詳解
在檢測階段，可能遇到的問題包括DNA條帶模糊、淡弱或無帶等，這些問題可能與DNA降解、上樣量、電泳緩沖液狀態(tài)、電泳條件不合適、鹽含量過多或蛋白污染等有關(guān)。解決這些問題需要仔細檢查并調(diào)整實驗參數(shù)。總的來說，瓊脂糖凝膠電泳是一種實用的分子生物學(xué)工具，但操作中需注意各種因素的控制以確保結(jié)果的準...
瓊脂糖凝膠的配制及SDS-PAGE電泳流程
進行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳所需試劑和設(shè)備包括蛋白樣品、SDS-PAGE加載緩沖液、PBS、Tris-Hcl（pH 8.8和6.8）、30%丙烯酰胺、10%SDS、10%過硫酸銨、5×SDS-PAGE電泳緩沖液、考馬斯亮藍R-250染色液、脫色液、天能預(yù)制膠以及垂直電泳槽、電泳儀、電源、移液槍、離心管和試劑瓶等。實驗步驟分為凝膠...
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上甘嶺區(qū)雙搖： ______ 1. 根據(jù)片段大小配制不同濃度的膠(改變分辨率),片段越小,需要膠濃度越大. 2. 膠要現(xiàn)制先用. 3. 選擇合適的Marker. 4. 配膠的緩沖液與電泳緩沖液要是同一種,且濃度一致(1倍). 5. 點樣時要加入loading buffer,并注意,不要將樣點到點樣孔之外(飄樣),也不要將膠戳漏(漏樣). 6. 根據(jù)片段大小,及電泳檢測目的,選擇合適的電壓及電泳時間. 7. EB染色.可選擇制膠時加入EB(要在溶玩膠后,且溫度至室溫時(用手握住制膠容器,不燙手即可));或電泳結(jié)束后,將膠放入EB溶液中染色.
上甘嶺區(qū)雙搖： ______ 凝膠電泳操作注意事項: 1. 緩沖系統(tǒng):在沒有離子存在時,電導(dǎo)率最小,DNA不遷移,或遷移極慢,在高離子強度的緩沖液中,電導(dǎo)很高并產(chǎn)熱,可能導(dǎo)致DNA變性,因此應(yīng)注意緩沖液的使用是否正確.長時間高壓電泳時,常更新緩沖液或在...
上甘嶺區(qū)雙搖： ______ 樓主可以去生物幫啊,依托互聯(lián)網(wǎng),在注重科學(xué)性、實用性和權(quán)威性的前提下,提供最新、領(lǐng)先、精準、高效、全面的生物產(chǎn)品和技術(shù)信息. 回收目的片段的方法很多,常用的有凍融法,低熔點瓊脂糖法,透析代法、電泳回收法、玻璃孔回收法...
上甘嶺區(qū)雙搖： ______ 根據(jù)分離要求確定是瓊脂糖還是聚丙烯酰胺,根據(jù)分離分子的分子量確定濃度; 加水加熱融化,裝好梳齒,合適溫度加入顯色劑(或者跑完電泳染色),倒膠板. 以下為瓊脂糖凝膠電泳的操作: 1 選擇合適的水平式電泳槽,調(diào)節(jié)電泳槽平面至...
上甘嶺區(qū)雙搖： ______ 1.體系配制時候最關(guān)鍵的幾個試劑一定要確定它們還有效、或者還沒被污染:引物,酶,超純水.這些東西最好自己收好,寫上個人的名字放好,冰盒上記得帶上橡皮筋,這樣就不會因為別人翻冰箱時候把你的冰盒碰散了,試劑都碰掉.否則,...
上甘嶺區(qū)雙搖： ______ 實驗步驟: 凝膠的制備: 1、 清洗干凈兩塊玻璃板,晾干后按要求裝配好垂直電泳板,兩塊玻璃板的兩側(cè)及底部用1%的瓊脂糖封邊,防止封閉不嚴而使聚丙烯酰胺液漏出. 2、 將裝好的玻璃電泳板傾斜成45~60℃角.把玻璃板在灌膠支架上...
上甘嶺區(qū)雙搖： ______ DNA如果降解或者混有其他雜質(zhì)比如蛋白質(zhì)、RNA的話,在電泳中可以檢測的到. 線性的單一DNA樣品一般是單條帶,質(zhì)粒的話可能會有2-3條帶. 如果條帶變寬、變暗、或者變成彌散的DNA條帶,表示DNA非特異的降解.' 如果條帶變成多條,表示可能被酶切.如果質(zhì)粒被單酶切,可能變成一條亮帶. 如果有蛋白質(zhì)污染,上樣孔可能發(fā)亮.如果有RNA污染,可能小分子量部分會有彌散. 等等. 標準是電泳條帶亮度.通過亮度可以粗略計算DNA條帶的含量.如果DNA有損失,對應(yīng)的條帶會變暗或者消失
上甘嶺區(qū)雙搖： ______ 水平式瓊脂糖凝膠電泳法,閉合環(huán)狀質(zhì)粒、線性質(zhì)粒和開環(huán)質(zhì)粒DNA由于構(gòu)形不同,在加溴化乙錠的瓊脂糖凝膠電泳上呈現(xiàn)不同的遷移率,因而在紫外燈下觀察,能區(qū)別閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA(cccDNA)、線性質(zhì)粒DNA(L-DNA)和開環(huán)質(zhì)粒DNA(...
上甘嶺區(qū)雙搖： ______ 分子克隆實驗流程 第一天 一:目的片段的擴增(PCR) PCR反應(yīng)的基本成分包括:模板DNA(待擴增DNA)、引物、4種脫氧核苷酸(dNTPs)、DNA聚合酶和適宜的緩沖液.PCR由變性--退火--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:①模板DNA的高...
上甘嶺區(qū)雙搖： ______ 電泳儀:電泳技術(shù)是分子生物學(xué)研究不可缺少的重要分析手段. 電泳一般分為自由界面電泳和區(qū)帶電泳兩大類,自由界面電泳不需支持物,如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等,這類電泳目前已很少使用.而區(qū)帶電泳則需用...
