空氣中的微生物種類？以及針對不同種類的培養(yǎng)基 根據(jù)不同的標準劃分，微生物的培養(yǎng)基種類有哪些，各舉
實驗一 常用培養(yǎng)基的制備、滅菌與消毒
一、實驗目的
了解培養(yǎng)基的配制原理；掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟；了解常見滅菌、清毒基本原理及方法；掌握干熱天菌、高壓蒸汽滅菌及過濾除菌的操作方法。
二、實驗原理
培養(yǎng)基是人工按一定比例配制的供微生物生長繁殖和合成代謝產(chǎn)物所需要的營養(yǎng)物質(zhì)的混合物。培養(yǎng)基的原材料可分為碳源、氮源、無機鹽、生長因素和水。根據(jù)微生物的種類和實驗目的不同，培養(yǎng)基也有不同的種類和配制方法。
牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養(yǎng)基，有時又稱為普通培養(yǎng)基。由于這種培養(yǎng)基中含有一般細胞生長繁殖所需要的最基本的營養(yǎng)物質(zhì)，所以可供微生物生長繁殖之用。
干熱天菌、高壓蒸汽滅菌方法主要是通過升溫使蛋白質(zhì)變性從而達到殺死微生物的效果。
三、試劑與器材
1.器材 試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、培養(yǎng)基、分裝器、天平、牛角匙、高壓蒸汽滅菌鍋、pH度紙、棉花、牛皮紙、記號筆、麻繩、紗布、吸管、培養(yǎng)皿、電烘箱、注射器、微孔濾膜過濾器、鑷子等。
2.試劑 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂
四、實驗內(nèi)容
1.稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查
2.干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物
3.高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4.過濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌
五、關鍵步驟及注意事項
1.要嚴格按配方配制。
2.調(diào)pH不要過頭。
3.干熱滅菌要注意物品不要堆放過緊，注意溫度的時間控制，70ºC以下放物、取物。
4.高壓滅菌要注意物品不要過多，加熱后排除冷空氣，到時降壓回零取物。
5.過濾除菌要注意各部件滅菌，壓濾時，壓力要適當，不可太猛太快，濾膜要注意清洗保存。
六、思考題
1.培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌?如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無菌的?
2.在配制培養(yǎng)基的操作過程中應注意些什么問題?為什么?
3.培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基應具備哪些條件?為什么?
4.培養(yǎng)基的配制原則是什么?
實驗二 土壤中微生物分離純化培養(yǎng)
一、實驗目的
掌握倒平板的方法和幾種常用的分離純化微生物的基本操作技術；了解不同的微生物菌落在斜面上、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基中的生長特征；進一步熟練和掌握微生物無菌操作技術；掌握微生物培養(yǎng)方法。
二、實驗原理
從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物的分離與純化。常用的分離、純化方法：單細胞挑取法，稀釋涂布平板法，稀釋混合平板法，平板劃線法 稀釋涂布平板法步驟：倒平板－制備土壤污水稀釋液－涂布－培養(yǎng)－挑菌落；平板劃線法步驟：倒平板－標記培養(yǎng)基名稱－劃線。
三、試劑與器材
1.器材 盛9m1無菌水的試管、盛90m1無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶、無菌玻璃涂棒、無菌吸管、接種環(huán)、酒精燈、無菌培養(yǎng)皿、顯微鏡、血細胞計數(shù)板等。
2.試劑 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，高氏1號培養(yǎng)基，查氏培養(yǎng)基
四、實驗內(nèi)容
1.土壤稀釋液的制備
2.微生物分離純化：稀釋涂平板法，平皿劃線分離法，微生物培養(yǎng)技術
五、關鍵步驟及注意事項
1.掌握含菌培養(yǎng)基的配制，嚴格控制溫度。
2.平板劃線應防止染菌，同時應注意劃線深度及密度。
六、思考題
1.如何確定平板上某單個菌落是否為純培養(yǎng)?請寫出實驗的主要步驟。
2.如果要分離得到極端嗜鹽細菌，在什么地方取樣品為宜?并說明理由。
實驗三 菌種保藏
一、實驗目的
1.學習并掌握菌種保藏的基本原理。
2.掌握常用的幾種不同的菌種保藏方法。
二、實驗原理
微生物個體微小、代謝旺盛、生長繁殖快，如果保存不妥容易發(fā)生變異和雜菌污染，甚至導致細胞死亡等現(xiàn)象。因此，保存好菌種是非常必要和重要的。常用的菌種保藏方法包括傳代培養(yǎng)法、載體法、懸液法、冷凍法和真空干燥法
三、試劑與器材
1.材料 大腸桿菌、青霉菌、放線菌
2.試劑 液體石蠟、甘油、五氧化二磷、95％乙醇、10％鹽酸、無水氯化鈣、食鹽、干冰
3.器材 無菌吸管、無菌滴管、無菌培養(yǎng)皿；安額管、凍干管、40目與100目篩子、油紙、濾紙條(0.5X1.2cm)、干燥器、真泵器、真空泵、真空壓力表、噴燈、L形五通管、冰箱、低溫冰箱(—30℃)、超低溫冰箱和液氮罐等。
四、實驗內(nèi)容
1.斜面保藏法
2.液體石蠟法
3.穿刺保藏法
4.砂土管保藏法
5.冷凍真空干燥保存法
五、關鍵步驟及注意事項
1.清楚各種保藏方法的優(yōu)缺點，針對不同要求選擇適宜的保藏方法。
2.熔封安瓶時防止封閉不嚴。
3.液氮凍存操作應防止凍傷。
六、思考題
根據(jù)你自己的實驗。談談1--2種菌種保藏方法的利弊?
實驗四 細菌形態(tài)觀察及單染色
一、實驗目的
1.了解簡單染色法的原理，并掌握其操作方法。
2.學習并掌握微生物涂片、染色的基本技術和無菌操作技術。
3.鞏固顯微鏡(油鏡)的使用方法。
4.初步認識細菌的形態(tài)特征。
二、實驗原理
細菌個體微小，且較透明，必須借助染色法使菌體著色，與背景形成鮮明的對比，以便在顯微鏡下進行觀察。根據(jù)實驗目的不同，可分為簡單染色法、鑒別染色法和特殊染色法等。簡單染色法是最基本的染色方法，是利用單一染料對細菌進行染色。此法操作簡便，適用于菌體一般形狀和細菌排列的觀察。常用堿性染料進行簡單染色。
三、試劑與器材
1.材料 大腸桿菌，枯草芽孢桿菌
2.試劑 呂氏堿性美藍染液(或草酸銨結晶紫染液)、齊氏石炭酸復紅染液。
3.器材 顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、雙層瓶(內(nèi)裝香柏油和二甲苯)等。
四、實驗內(nèi)容
簡單染色法：涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→鏡檢
五、關鍵步驟及注意事項
1.涂片時，生理鹽水及取菌不宜過多，涂片應盡可能均勻，
2.水洗步驟水流不宜過大，過急，以免涂片薄膜脫落。
六、思考題
1.你認為制備細菌染色標本時，尤其應該注意哪些環(huán)幣?
2.為什么要求制片完全干燥后才能用油鏡觀察?
3.如果你的涂片未經(jīng)熱固定，將會出現(xiàn)什么問題?如果加熱溫度過高、時間太長，又會怎樣呢?
實驗五 放線菌及霉菌形態(tài)觀察
一、實驗目的
1.了解放線菌、霉菌形態(tài)觀察的原理。
2.學習并掌握觀察放線菌、霉菌形態(tài)的操作方法。
3.初步了解放線菌、霉菌的形態(tài)特征。
二、實驗原理
放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類革蘭氏陽性細菌。常見放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養(yǎng)基表面或深入培養(yǎng)基內(nèi)生長的叫基內(nèi)菌絲(簡稱“基絲”)，基絲生長到一定階段還能向空氣中生長出氣生菌絲(簡稱“氣絲”)，并進一步分化產(chǎn)生孢子絲及孢子。有的放線菌只產(chǎn)生基絲而無氣絲。在顯微鏡下直接觀察時，氣絲在上層、基絲在下層，氣絲色暗，基絲較透明。孢子絲依種類的不同，有直、波曲、各種螺旋形或輪生。
霉菌可產(chǎn)生復合分枝的菌絲體，分基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長到一定階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。霉菌菌絲體(尤其是繁殖菌絲)及孢子的形態(tài)特征是識別不同種類霉菌的重要依據(jù)。霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細菌和放線菌粗得多，常是細菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因此，用低倍顯微鏡即可觀察。人們設計了各種培養(yǎng)和觀察方法，這些方法的主要目的是為了盡可能保持放線菌自然生長狀態(tài)下的形態(tài)特征。本實驗采用插片法。
插片法：將放線菌接種在瓊脂平板上，插上滅菌蓋玻片后培養(yǎng)，使放線菌菌絲沿著培養(yǎng)基表面與蓋玻片的交接處生長而附著在蓋玻上。觀察時，輕輕取出蓋玻片，置于載玻片上直接鏡檢。這種方法可觀察到放線菌自然生長狀態(tài)下的特征，而且便于觀察不同生長期的形態(tài)。
三、試劑與器材
1.材料 黑曲霉、青霉和根霉，細黃鏈霉菌或青色鏈霉菌，滅菌的高氏I號瓊脂和滅菌的查氏培養(yǎng)基。
2.實驗器材 經(jīng)滅菌的：平皿、玻璃紙、無菌吸管、蓋玻片、玻璃涂棒，以及載玻片、接種環(huán)、接種鏟、鑷子、顯微鏡等。
四、實驗內(nèi)容
倒平板→接種→插片→培養(yǎng)→鏡檢
五、關鍵步驟及注意事項
1.倒平板要厚一些，接種時劃線要密。
2.插片時要有一定角度并與劃線垂直。
3.觀察時，宜用略暗光線；先用低倍鏡找到適當視野，更換高倍鏡觀察。
4.如果用0.1%美藍對培養(yǎng)后的蓋玻片進行染色后觀察，效果會更好。
六、思考題
1.鏡檢時，你如何區(qū)分放線菌的基內(nèi)菌絲和氣生菌絲?
2.你認為霉菌和放線菌菌絲的主要區(qū)別是什么？
實驗六 革蘭氏染色及芽孢染色
一、實驗目的
1.了解革蘭氏染色法和芽孢染色法的原理，并掌握其操作方法。
2.了解革蘭氏染色法在細菌分類鑒定中的重要性。
3.學習并掌握微生物涂片、染色的基本技術和無菌操作技術。
4.學習顯微鏡(油鏡)的使用方法。
5.初步認識細菌的形態(tài)特征。
二、實驗原理
革蘭氏染色法的基本步驟是：先用初染劑結晶紫進行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇(或丙酮)脫色，最后用復染劑(如番紅)復染。經(jīng)此方法染色后，細胞保留初染劑藍紫色的細菌為革蘭氏陽性菌；如果細胞中初染劑被脫色劑洗脫而使細菌染上復染劑的顏色(紅色)，該菌屬于革蘭氏陰性菌。革蘭氏染色反應是細菌重要的鑒別特征，為保證染色結果的正確性，采用規(guī)范的染色方法是十分必要的。
芽孢染色法的基本原理，用著色力強的染色劑孔雀綠或石炭酸復紅，在加熱條件下染色，使染料不僅進入菌體也可進入芽孢內(nèi)，進入菌體的染料經(jīng)水洗后被脫色，而芽孢一經(jīng)著色難以被水洗脫，當用對比度大的復染劑染色后，芽孢仍保留初染劑的顏色，而菌體和芽孢囊被染成復染劑的顏色，使芽孢和菌體更易于區(qū)分。
三、試劑與器材
1.材料：枯草芽孢桿菌12～18h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，大腸桿菌約24h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物
2.試劑 革蘭氏染色液(結晶紫液、碘液、95％乙醇、番紅液)。5％孔雀綠水溶液
3.實驗器材 小試管、滴管、燒杯、試管架、濾紙、木夾子、載玻片、蓋玻片、凹載玻片、無菌水、顯微鏡等、接種環(huán)、雙層瓶(內(nèi)裝香柏油和二甲苯)、擦鏡紙、生理鹽水等。
四、實驗內(nèi)容
1.革蘭氏染色法 制片→初染→媒染→脫色→復染→鏡檢。
2.Schaefer-Fulton氏染色法 制片→染色→水洗→復染→水洗→鏡檢。
五、關鍵步驟及注意事項
1.涂片時，生理鹽水及取菌不宜過多，涂片應盡可能均勻，
2.乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關鍵環(huán)節(jié)，嚴格掌握脫色時間。
六、思考題
1.你認為要得到正確的改良的革蘭氏染色結果必須注意哪些操作?關鍵在哪一步?為什么?
2.現(xiàn)有一株細菌寬度明顯大于大腸桿菌的粗壯桿菌，請你鑒定其革蘭氏染色反應。你怎樣運用大腸桿菌和金黃色葡萄球菌為對照菌株進行涂片染色，以證明你的染色結果正確性。
3.你的染色結果是否正確?如果不正確，請說明原因。
4.若涂片中觀察到的只是大量游離芽孢，很少看到芽孢囊及營養(yǎng)細胞，你認為這是什么原因?
5.說明芽孢染色法的原理。用簡單染色法能否觀察到細菌的芽孢?
實驗七 酵母菌的形態(tài)觀察及死活細胞的鑒定
一、實驗目的
1.觀察酵母菌的形態(tài)特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌與細菌形態(tài)特征的區(qū)別。
2.學習鑒別死活細胞的實驗方法。
二、實驗原理
酵母菌是單細胞的真核微生物，菌體比細菌大而且不運動。酵母菌的繁殖方式分為無性繁殖和有性繁殖兩種，以無性繁殖為主。芽殖是酵母菌普遍的無性繁殖方式，少數(shù)為裂殖；有性繁殖是產(chǎn)生子囊和子囊孢子。本實驗是通過美藍染液水浸片和水一碘液水浸片來觀察酵母的形態(tài)和芽殖方式。
美藍是一種無毒性的染料，它的氧化型呈藍色，還原型無色。用美藍對酵母活細胞染色時，由于細胞的新陳代謝作用，細胞內(nèi)具有較強的還原能力，能使美藍由藍色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型，而對代謝作用微弱或死細胞，無此還原能力或還原能力極弱，而被美藍染成藍色或淡藍色。因此，不僅用此法可觀察酵母細胞形態(tài)，也可用來鑒別酵母菌的死細胞和活細胞。
三、試劑與器材
1.材料 釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡爾酵母(Saccharomyces calsbergensis)培養(yǎng)2天左右的麥芽汁(或豆芽汁)液體培養(yǎng)物。
2.試劑 0.05％和O.1％呂氏堿性美藍染色液、革蘭氏染色用的碘液。
3.器材 顯微鏡、載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、灑精燈等。
四、實驗內(nèi)容
1.美藍浸片觀察 酵母培養(yǎng)→制片→染色→鏡檢→30分鐘后再鏡檢
2.水-碘浸片觀察
五、關鍵步驟及注意事項
1.染液不宜過多或過少，否則，在蓋上蓋玻片時，菌液溢出或出現(xiàn)大量氣泡。
2.用鑷子取一塊蓋玻片，先將一側與菌液接觸，然后慢慢將蓋玻片放下，使其蓋在菌液上，蓋玻片不宜平著放下，避免氣泡產(chǎn)生。
六、思考題
1.呂氏堿性美藍染液濃度和作用時間的不同，對酵母菌死細胞數(shù)量有何影響?試分析其原因。
2.在顯微鏡下，酵母菌有哪些突出的特征區(qū)別于一般細菌?
實驗八 微生物直接計數(shù)法及測微技術
一、實驗目的
1.了解血球計數(shù)板計數(shù)原理，并掌握計數(shù)方法。
2.掌握用測微尺測定微生物大小的方法。
二、實驗原理
顯微鏡直接計數(shù)法是將一定稀釋的菌體或孢子懸液注入血球計數(shù)板的計數(shù)室中，于顯微鏡下直接計數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法。因為計數(shù)板是一塊特別的載玻片。其上由四條槽構成三個平臺；中間較寬的平臺又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺上各刻有一個方格網(wǎng)，每個方格網(wǎng)共分為九個大方格，一種是一個大方格分成25個中方格，而每個中方格又分成16個小方格(見圖2—3—44)；另一種是一個大方格分成16個中方格，每個中方格又分成25個小方格，無論哪種每個大方格中的小方格都是400個。每一個大方格邊長為0．1mm，所以計數(shù)室的容積為0．1mm3。計數(shù)時，通常只用5個中格內(nèi)的菌體(孢子)數(shù)即可。然后求出每個中方格的平均值，再乘上25或16，得出一個大方格中的總茵數(shù)，再換算成lml菌液中的總菌數(shù)。若設5個中方格中總菌數(shù)為N，菌液稀釋倍數(shù)為M，如果是25個中方格計數(shù)板，則計算方法為：
lml菌液中的總菌數(shù)=平均每個中格中菌的個數(shù)×25×104×M=50000N•M(個)
微生物細胞的大小是微生物基本的形態(tài)特征，也是分類鑒定的依據(jù)之一。微生物大小的測定，需要在顯微鏡下，借助于特殊的測量工具——測微尺，包括目鏡測微尺和鏡臺測微尺。鏡臺測微尺是中央部分刻有精確等分線的載玻片，一般是將1mm等分為100格，每格長0．01mm(即10pm)。鏡臺測微尺并不直接用來測量細胞的大小，而是用于校正目鏡測微尺每格的相對長度。
三、試劑與器材
1.材料 釀酒酵母、藤黃微球菌和大腸桿菌的染色標本片、釀酒酵母24h馬鈴薯斜面培養(yǎng)物。
2.實驗器材 細胞計數(shù)板、顯微鏡、蓋玻片、無菌毛細滴管、目鏡測微尺、鏡臺測微尺、載玻片、蓋玻片、顯微鏡等。
四、實驗內(nèi)容
1.微生物直接計數(shù)法 菌懸液制備→鏡檢計數(shù)室→加樣品→顯微鏡計數(shù)→清洗血細胞計數(shù)板
2.微生物測微技術 裝目鏡測微尺→校正→菌體大小測定
五、關鍵步驟及注意事項
1.防止加樣空氣泡產(chǎn)生。
2.調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強弱適當。
六、思考題
1.根據(jù)你的體會，說明用血細胞計數(shù)板計數(shù)的誤差主要來自哪些方面?應如何盡量減少誤差、力求準確?
2.某單位要求知道一種干酵母粉中的活菌存活率，請設計1～2種可行的檢測方法。
3.為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時，必須用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺進行校正?
實驗九 大腸桿菌生長曲線的測定
一、實驗目的
1.了解大腸桿菌的生長曲線特征和繁殖規(guī)律，并學會繪制生長曲線。
2.復習光電比濁法測量細菌數(shù)量的方法。
二、實驗原理
將一定量的細菌轉(zhuǎn)入新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)細胞要經(jīng)歷延遲期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個階段。以培養(yǎng)時間為橫坐標，以細菌數(shù)目的對數(shù)或生長速率為縱坐標作圖所繪制的曲線稱為該細菌的生長曲線。不同的細菌在相同的培養(yǎng)條件下其生長曲線不同，同樣的細菌在不同的培養(yǎng)條件下所繪制的生長曲線也不相同。
三、試劑與器材
1.材料與試劑 大腸桿菌、LB液體培養(yǎng)基70ml、分裝2支大試管(5ml／支)、剩余60ml裝入250ml的三角瓶。
2.器材 722型分光光度計、恒溫振蕩搖床、無菌試管、無菌吸管等。
四、實驗內(nèi)容
編號→接種→培養(yǎng)→比濁測定
五、關鍵步驟及注意事項
1.測定OD值時，要求從低濃度到高濃度測定
2.嚴格控制培養(yǎng)時間
六、思考題
1.根據(jù)實驗數(shù)據(jù)畫出生長曲線，并說明大腸桿菌生長特征。
2.如果用活菌計數(shù)法制作生長曲線，你認為會有什么不同?兩者各有什么缺點7．
3.次生禮謝產(chǎn)物的大量積累在哪個時期?根據(jù)細菌生長繁殖的規(guī)律，采用哪些措施可使次生代謝產(chǎn)物積累更多?
實驗十 水中細菌總數(shù)的測定
一、實驗目的
1.學習水樣的采取方法和水樣細菌總數(shù)測定的方法。
2.了解水源水的平板菌落計數(shù)的原理。
二、實驗原理
本實驗應用平板計數(shù)技術測定水中細菌總數(shù)。由于水中細菌種類繁多，它們對營養(yǎng)和其他生長條件的要求差別很大，不可能找到一種培養(yǎng)基在一種條件下，使水中所有的細菌均能生長繁殖，因此，以一定的培養(yǎng)基平板上生長出來的菌落，計算出來的水中細菌總數(shù)僅是一種近似值。目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基。
三、試劑與器材
1.試劑 牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，滅菌水
2.器材 滅菌三角瓶，滅菌的帶玻璃塞瓶，滅菌培養(yǎng)皿，滅菌吸管，滅菌試管等。
四、實驗內(nèi)容
1.水樣的采取
2.細菌總數(shù)測定
3.菌落計數(shù)方法
五、關鍵步驟及注意事項
1.注意全過程防止染菌
六、思考題
從自來水的細菌總數(shù)結果來看，是否合乎飲用水的標準？
實驗十一 細菌細胞的生化反應實驗
一、實驗目的
了解并掌握細菌鑒定中常用生理生化反應的原理和方法。
二、實驗原理
各種細菌由于具有不同的酶系統(tǒng)，致使它們能利用不同的底物，或雖然可以利用相同的底物，卻產(chǎn)生不同的代謝產(chǎn)物，因此可以利用各種生理生化反應來鑒別細菌。
糖發(fā)酵是最常用的生化反應，存在于大多數(shù)細菌中。不同的細菌在糖的分解能力上存在很大的差異。有些細菌能分解某種糖并產(chǎn)生酸性物質(zhì)(如乳酸、丙酸、醋酸等)和氣體(如二氧化碳、氫、甲烷等)，而有些細菌只產(chǎn)生酸不產(chǎn)生氣體。例如大腸桿菌分解乳糖和葡萄糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣，普通變形桿菌分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，但不能分解乳糖。酸的產(chǎn)生可利用指示劑來判斷。在培養(yǎng)基中加入溴甲酚紫(pH5．2為黃色，pH6．8為紫色)，當發(fā)酵產(chǎn)酸時，使培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色。氣體的產(chǎn)生可由發(fā)酵試管中倒置的德漢氏小管中有無氣泡的出現(xiàn)來驗證．
三、試劑與器材
1.材料大腸桿菌、普通變性桿菌、產(chǎn)氣桿菌、糖發(fā)酵培養(yǎng)基、蛋白胨水培養(yǎng)基、葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。
2.試劑甲基紅試劑、40％KOH、5％a一萘酚、乙醚、吲哚試劑。
3.實驗器材德漢氏小管、試管、接種環(huán)、恒溫培養(yǎng)箱。
四、實驗內(nèi)容
培養(yǎng)基配制→編號→試管→接種→培養(yǎng)→觀察結果
五、關鍵步驟及注意事項
1.要嚴格按照培養(yǎng)基配方配制培養(yǎng)基。
2.觀察結果時要注意滴加藥量及反應時間。
六、思考題
1.哪些生理生化試驗可用于區(qū)別大腸桿菌和產(chǎn)生腸桿菌?結果如何?
2.做糖發(fā)酵試驗時應注意哪些問題?
3.甲基紅試驗和伏一普試驗的最終產(chǎn)物如何?為什么會出現(xiàn)不同的最終產(chǎn)物?
實驗十二 噬菌體的分離、純化及效價測定
一、實驗目的
1.學習分離、純化噬菌體的原理和方法
2.觀察噬菌斑的形態(tài)和大小
3.掌握噬菌體效價測定的基本方法
二、實驗原理
噬菌體是細菌的專性寄生物，自然界中凡是有細菌存在的地方，均可以發(fā)現(xiàn)其特異性的噬菌體，噬菌體侵入細菌細胞后，利用宿主細胞的酶系統(tǒng)進行復制和增殖，最終導致細菌細胞裂解，噬菌體從細胞中釋放出來，可以進一步侵染細菌細胞。在液體培養(yǎng)基中，噬菌體可以使渾濁的菌懸液變?yōu)槌吻濉Ｔ陂L有宿主細菌的固體培養(yǎng)基平板上，噬菌體可以裂解細菌形成透明的空斑，即噬菌斑，一個噬菌體產(chǎn)生一個噬菌斑，因此可以利用這個性質(zhì)對噬菌體進行分離和效價的測定。
噬菌體的效價是指噬菌體的濃度，即一毫升培養(yǎng)液中所含有的噬菌體數(shù)量。噬菌體效價的測定方法多采用雙層瓊脂平板法。先在培養(yǎng)皿中倒入底層固體培養(yǎng)基，凝固后再倒入含有宿主細菌和一定稀釋度噬菌體的半固體培養(yǎng)基。培養(yǎng)一段時間后，計算噬菌斑的數(shù)量。
三、試劑與器材
1.材料大腸桿菌、牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨半固體培養(yǎng)基(含有瓊脂0．5％，試管分裝，每管3～5m1)、三倍濃縮的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基。
2.器材培養(yǎng)皿、無菌吸管、三角瓶、抽濾瓶、蔡氏細菌濾器、真空泵、陰溝污水。
四、實驗內(nèi)容
噬菌體分離→噬菌體純化→效價測定
五、關鍵步驟及注意事項
1.噬菌體時要注意細菌濾器的型號。
2.純化噬菌體時要注意形態(tài)、大小。
3.效價測定時要注意雙層瓊脂平板法的使用技巧。
六、思考題
1.在固體培養(yǎng)基平板上為什么能形成噬茵斑?
2.從固體培養(yǎng)基平板上得到的噬菌斑數(shù)目，如何計算噬菌體的效價？
沒用的東西貼那么多……太不敬業(yè)了
事實上，自然環(huán)境中的微生物有99%是不可以人工培養(yǎng)的，要獲得盡量多的空氣微生物的培養(yǎng)，就要盡量選擇豐富培養(yǎng)基，而不是人工培養(yǎng)基。肉湯培養(yǎng)基也可以。另外LB培養(yǎng)基，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基都可以的。
呼叔17258489124： 簡述微生物的分類. -
漢源縣退火： ______ 按有無細胞核分為真和微生物和原核微生物,不具備細胞條件的為非細胞類,按對氧氣的反應分為需氧性微生物厭氧性微生物兼氧性微生物,按不同的因素分微生物可以分為很多種
呼叔17258489124： 空氣中一般有哪些微生物?對人體有什么影響? -
漢源縣退火： ______ 各種各樣的細菌、病毒微粒都是依賴空氣傳播的病原體.舉個例子:人類流感病毒.但是,一般上人體百的免疫系統(tǒng)足以抵抗大部分細菌的侵害,所以不會發(fā)病.至于度病毒,人類免疫系統(tǒng)不能有效的對付這類病原體,因此受感染并出現(xiàn)癥狀的機率頗高.
呼叔17258489124： 微生物的多樣性包括哪些方面?萬分感謝最好歸為那幾大方面
漢源縣退火： ______ 微生物在地球上幾乎無處不有,無孔不入,人的皮膚上,口腔,腸道里都有許多微生物.微生物聚集最多的地方是土壤,土壤是各種微生物生長繁殖的大本營,約占微生物...
呼叔17258489124： 如何解決工作時空氣中的微生物? -
漢源縣退火： ______ 先把工作室密封,然后用甲醛熏蒸,或用乙酸熏蒸,或用紫外線燈照射都可以.實在不行就只好在超凈工作臺里干活了. 看了你的補充. 你是說生產(chǎn)車間嗎?按照GMP規(guī)范,的確不能有超過規(guī)定的微生物的.你工作的車間不是GMP的嗎?如...
呼叔17258489124： 有沒有人知道"空氣中的細菌"主要是什么?? -
漢源縣退火： ______ 細菌種類多、繁殖快、適應環(huán)境能力強,因此,細菌廣泛分布于自然界,在水、土壤、空氣、食物、人和動物的體表以及與外界相通的腔道中,常有各種細菌和其它微生物存在.在自然界物質(zhì)循環(huán)上起重要作用,不少是對人類有益的,對人致病...
呼叔17258489124： 微生物分類表或分類的詳細步驟和方法??? -
漢源縣退火： ______ 微生物(Microorganism)是廣泛存在于自然界中的一群肉眼看不見,必須借助光學顯微鏡或電子顯微鏡放大數(shù)百倍、數(shù)千倍甚至數(shù)萬倍才能觀察到的微小生物的總稱.它們具有體形微小、結構簡單、繁殖迅速、容易變異及適應環(huán)境能力強等優(yōu)...
呼叔17258489124： 微生物的分類 -
漢源縣退火： ______ 微生物分類目前采用的當然還是其結構的不同進行分類,分為 原核細胞型 真核細胞型 非細胞型
呼叔17258489124： 什么是空氣污染中的生物污染?
漢源縣退火： ______ 最近我們國家越來越發(fā)達,但是空氣質(zhì)量確實越來越差,每天能看到藍天白云,晚上能看見星星,成了一種奢求,可是這些東西是我們本來就該有的呀, 卻成了奢侈品....
一、實驗目的
了解培養(yǎng)基的配制原理；掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟；了解常見滅菌、清毒基本原理及方法；掌握干熱天菌、高壓蒸汽滅菌及過濾除菌的操作方法。
二、實驗原理
培養(yǎng)基是人工按一定比例配制的供微生物生長繁殖和合成代謝產(chǎn)物所需要的營養(yǎng)物質(zhì)的混合物。培養(yǎng)基的原材料可分為碳源、氮源、無機鹽、生長因素和水。根據(jù)微生物的種類和實驗目的不同，培養(yǎng)基也有不同的種類和配制方法。
牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養(yǎng)基，有時又稱為普通培養(yǎng)基。由于這種培養(yǎng)基中含有一般細胞生長繁殖所需要的最基本的營養(yǎng)物質(zhì)，所以可供微生物生長繁殖之用。
干熱天菌、高壓蒸汽滅菌方法主要是通過升溫使蛋白質(zhì)變性從而達到殺死微生物的效果。
三、試劑與器材
1.器材 試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、培養(yǎng)基、分裝器、天平、牛角匙、高壓蒸汽滅菌鍋、pH度紙、棉花、牛皮紙、記號筆、麻繩、紗布、吸管、培養(yǎng)皿、電烘箱、注射器、微孔濾膜過濾器、鑷子等。
2.試劑 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂
四、實驗內(nèi)容
1.稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查
2.干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物
3.高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4.過濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌
五、關鍵步驟及注意事項
1.要嚴格按配方配制。
2.調(diào)pH不要過頭。
3.干熱滅菌要注意物品不要堆放過緊，注意溫度的時間控制，70ºC以下放物、取物。
4.高壓滅菌要注意物品不要過多，加熱后排除冷空氣，到時降壓回零取物。
5.過濾除菌要注意各部件滅菌，壓濾時，壓力要適當，不可太猛太快，濾膜要注意清洗保存。
六、思考題
1.培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌?如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無菌的?
2.在配制培養(yǎng)基的操作過程中應注意些什么問題?為什么?
3.培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基應具備哪些條件?為什么?
4.培養(yǎng)基的配制原則是什么?
實驗二 土壤中微生物分離純化培養(yǎng)
一、實驗目的
掌握倒平板的方法和幾種常用的分離純化微生物的基本操作技術；了解不同的微生物菌落在斜面上、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基中的生長特征；進一步熟練和掌握微生物無菌操作技術；掌握微生物培養(yǎng)方法。
二、實驗原理
從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物的分離與純化。常用的分離、純化方法：單細胞挑取法，稀釋涂布平板法，稀釋混合平板法，平板劃線法 稀釋涂布平板法步驟：倒平板－制備土壤污水稀釋液－涂布－培養(yǎng)－挑菌落；平板劃線法步驟：倒平板－標記培養(yǎng)基名稱－劃線。
三、試劑與器材
1.器材 盛9m1無菌水的試管、盛90m1無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶、無菌玻璃涂棒、無菌吸管、接種環(huán)、酒精燈、無菌培養(yǎng)皿、顯微鏡、血細胞計數(shù)板等。
2.試劑 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，高氏1號培養(yǎng)基，查氏培養(yǎng)基
四、實驗內(nèi)容
1.土壤稀釋液的制備
2.微生物分離純化：稀釋涂平板法，平皿劃線分離法，微生物培養(yǎng)技術
五、關鍵步驟及注意事項
1.掌握含菌培養(yǎng)基的配制，嚴格控制溫度。
2.平板劃線應防止染菌，同時應注意劃線深度及密度。
六、思考題
1.如何確定平板上某單個菌落是否為純培養(yǎng)?請寫出實驗的主要步驟。
2.如果要分離得到極端嗜鹽細菌，在什么地方取樣品為宜?并說明理由。
實驗三 菌種保藏
一、實驗目的
1.學習并掌握菌種保藏的基本原理。
2.掌握常用的幾種不同的菌種保藏方法。
二、實驗原理
微生物個體微小、代謝旺盛、生長繁殖快，如果保存不妥容易發(fā)生變異和雜菌污染，甚至導致細胞死亡等現(xiàn)象。因此，保存好菌種是非常必要和重要的。常用的菌種保藏方法包括傳代培養(yǎng)法、載體法、懸液法、冷凍法和真空干燥法
三、試劑與器材
1.材料 大腸桿菌、青霉菌、放線菌
2.試劑 液體石蠟、甘油、五氧化二磷、95％乙醇、10％鹽酸、無水氯化鈣、食鹽、干冰
3.器材 無菌吸管、無菌滴管、無菌培養(yǎng)皿；安額管、凍干管、40目與100目篩子、油紙、濾紙條(0.5X1.2cm)、干燥器、真泵器、真空泵、真空壓力表、噴燈、L形五通管、冰箱、低溫冰箱(—30℃)、超低溫冰箱和液氮罐等。
四、實驗內(nèi)容
1.斜面保藏法
2.液體石蠟法
3.穿刺保藏法
4.砂土管保藏法
5.冷凍真空干燥保存法
五、關鍵步驟及注意事項
1.清楚各種保藏方法的優(yōu)缺點，針對不同要求選擇適宜的保藏方法。
2.熔封安瓶時防止封閉不嚴。
3.液氮凍存操作應防止凍傷。
六、思考題
根據(jù)你自己的實驗。談談1--2種菌種保藏方法的利弊?
實驗四 細菌形態(tài)觀察及單染色
一、實驗目的
1.了解簡單染色法的原理，并掌握其操作方法。
2.學習并掌握微生物涂片、染色的基本技術和無菌操作技術。
3.鞏固顯微鏡(油鏡)的使用方法。
4.初步認識細菌的形態(tài)特征。
二、實驗原理
細菌個體微小，且較透明，必須借助染色法使菌體著色，與背景形成鮮明的對比，以便在顯微鏡下進行觀察。根據(jù)實驗目的不同，可分為簡單染色法、鑒別染色法和特殊染色法等。簡單染色法是最基本的染色方法，是利用單一染料對細菌進行染色。此法操作簡便，適用于菌體一般形狀和細菌排列的觀察。常用堿性染料進行簡單染色。
三、試劑與器材
1.材料 大腸桿菌，枯草芽孢桿菌
2.試劑 呂氏堿性美藍染液(或草酸銨結晶紫染液)、齊氏石炭酸復紅染液。
3.器材 顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、雙層瓶(內(nèi)裝香柏油和二甲苯)等。
四、實驗內(nèi)容
簡單染色法：涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→鏡檢
五、關鍵步驟及注意事項
1.涂片時，生理鹽水及取菌不宜過多，涂片應盡可能均勻，
2.水洗步驟水流不宜過大，過急，以免涂片薄膜脫落。
六、思考題
1.你認為制備細菌染色標本時，尤其應該注意哪些環(huán)幣?
2.為什么要求制片完全干燥后才能用油鏡觀察?
3.如果你的涂片未經(jīng)熱固定，將會出現(xiàn)什么問題?如果加熱溫度過高、時間太長，又會怎樣呢?
實驗五 放線菌及霉菌形態(tài)觀察
一、實驗目的
1.了解放線菌、霉菌形態(tài)觀察的原理。
2.學習并掌握觀察放線菌、霉菌形態(tài)的操作方法。
3.初步了解放線菌、霉菌的形態(tài)特征。
二、實驗原理
放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類革蘭氏陽性細菌。常見放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養(yǎng)基表面或深入培養(yǎng)基內(nèi)生長的叫基內(nèi)菌絲(簡稱“基絲”)，基絲生長到一定階段還能向空氣中生長出氣生菌絲(簡稱“氣絲”)，并進一步分化產(chǎn)生孢子絲及孢子。有的放線菌只產(chǎn)生基絲而無氣絲。在顯微鏡下直接觀察時，氣絲在上層、基絲在下層，氣絲色暗，基絲較透明。孢子絲依種類的不同，有直、波曲、各種螺旋形或輪生。
霉菌可產(chǎn)生復合分枝的菌絲體，分基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長到一定階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。霉菌菌絲體(尤其是繁殖菌絲)及孢子的形態(tài)特征是識別不同種類霉菌的重要依據(jù)。霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細菌和放線菌粗得多，常是細菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因此，用低倍顯微鏡即可觀察。人們設計了各種培養(yǎng)和觀察方法，這些方法的主要目的是為了盡可能保持放線菌自然生長狀態(tài)下的形態(tài)特征。本實驗采用插片法。
插片法：將放線菌接種在瓊脂平板上，插上滅菌蓋玻片后培養(yǎng)，使放線菌菌絲沿著培養(yǎng)基表面與蓋玻片的交接處生長而附著在蓋玻上。觀察時，輕輕取出蓋玻片，置于載玻片上直接鏡檢。這種方法可觀察到放線菌自然生長狀態(tài)下的特征，而且便于觀察不同生長期的形態(tài)。
三、試劑與器材
1.材料 黑曲霉、青霉和根霉，細黃鏈霉菌或青色鏈霉菌，滅菌的高氏I號瓊脂和滅菌的查氏培養(yǎng)基。
2.實驗器材 經(jīng)滅菌的：平皿、玻璃紙、無菌吸管、蓋玻片、玻璃涂棒，以及載玻片、接種環(huán)、接種鏟、鑷子、顯微鏡等。
四、實驗內(nèi)容
倒平板→接種→插片→培養(yǎng)→鏡檢
五、關鍵步驟及注意事項
1.倒平板要厚一些，接種時劃線要密。
2.插片時要有一定角度并與劃線垂直。
3.觀察時，宜用略暗光線；先用低倍鏡找到適當視野，更換高倍鏡觀察。
4.如果用0.1%美藍對培養(yǎng)后的蓋玻片進行染色后觀察，效果會更好。
六、思考題
1.鏡檢時，你如何區(qū)分放線菌的基內(nèi)菌絲和氣生菌絲?
2.你認為霉菌和放線菌菌絲的主要區(qū)別是什么？
實驗六 革蘭氏染色及芽孢染色
一、實驗目的
1.了解革蘭氏染色法和芽孢染色法的原理，并掌握其操作方法。
2.了解革蘭氏染色法在細菌分類鑒定中的重要性。
3.學習并掌握微生物涂片、染色的基本技術和無菌操作技術。
4.學習顯微鏡(油鏡)的使用方法。
5.初步認識細菌的形態(tài)特征。
二、實驗原理
革蘭氏染色法的基本步驟是：先用初染劑結晶紫進行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇(或丙酮)脫色，最后用復染劑(如番紅)復染。經(jīng)此方法染色后，細胞保留初染劑藍紫色的細菌為革蘭氏陽性菌；如果細胞中初染劑被脫色劑洗脫而使細菌染上復染劑的顏色(紅色)，該菌屬于革蘭氏陰性菌。革蘭氏染色反應是細菌重要的鑒別特征，為保證染色結果的正確性，采用規(guī)范的染色方法是十分必要的。
芽孢染色法的基本原理，用著色力強的染色劑孔雀綠或石炭酸復紅，在加熱條件下染色，使染料不僅進入菌體也可進入芽孢內(nèi)，進入菌體的染料經(jīng)水洗后被脫色，而芽孢一經(jīng)著色難以被水洗脫，當用對比度大的復染劑染色后，芽孢仍保留初染劑的顏色，而菌體和芽孢囊被染成復染劑的顏色，使芽孢和菌體更易于區(qū)分。
三、試劑與器材
1.材料：枯草芽孢桿菌12～18h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，大腸桿菌約24h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物
2.試劑 革蘭氏染色液(結晶紫液、碘液、95％乙醇、番紅液)。5％孔雀綠水溶液
3.實驗器材 小試管、滴管、燒杯、試管架、濾紙、木夾子、載玻片、蓋玻片、凹載玻片、無菌水、顯微鏡等、接種環(huán)、雙層瓶(內(nèi)裝香柏油和二甲苯)、擦鏡紙、生理鹽水等。
四、實驗內(nèi)容
1.革蘭氏染色法 制片→初染→媒染→脫色→復染→鏡檢。
2.Schaefer-Fulton氏染色法 制片→染色→水洗→復染→水洗→鏡檢。
五、關鍵步驟及注意事項
1.涂片時，生理鹽水及取菌不宜過多，涂片應盡可能均勻，
2.乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關鍵環(huán)節(jié)，嚴格掌握脫色時間。
六、思考題
1.你認為要得到正確的改良的革蘭氏染色結果必須注意哪些操作?關鍵在哪一步?為什么?
2.現(xiàn)有一株細菌寬度明顯大于大腸桿菌的粗壯桿菌，請你鑒定其革蘭氏染色反應。你怎樣運用大腸桿菌和金黃色葡萄球菌為對照菌株進行涂片染色，以證明你的染色結果正確性。
3.你的染色結果是否正確?如果不正確，請說明原因。
4.若涂片中觀察到的只是大量游離芽孢，很少看到芽孢囊及營養(yǎng)細胞，你認為這是什么原因?
5.說明芽孢染色法的原理。用簡單染色法能否觀察到細菌的芽孢?
實驗七 酵母菌的形態(tài)觀察及死活細胞的鑒定
一、實驗目的
1.觀察酵母菌的形態(tài)特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌與細菌形態(tài)特征的區(qū)別。
2.學習鑒別死活細胞的實驗方法。
二、實驗原理
酵母菌是單細胞的真核微生物，菌體比細菌大而且不運動。酵母菌的繁殖方式分為無性繁殖和有性繁殖兩種，以無性繁殖為主。芽殖是酵母菌普遍的無性繁殖方式，少數(shù)為裂殖；有性繁殖是產(chǎn)生子囊和子囊孢子。本實驗是通過美藍染液水浸片和水一碘液水浸片來觀察酵母的形態(tài)和芽殖方式。
美藍是一種無毒性的染料，它的氧化型呈藍色，還原型無色。用美藍對酵母活細胞染色時，由于細胞的新陳代謝作用，細胞內(nèi)具有較強的還原能力，能使美藍由藍色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型，而對代謝作用微弱或死細胞，無此還原能力或還原能力極弱，而被美藍染成藍色或淡藍色。因此，不僅用此法可觀察酵母細胞形態(tài)，也可用來鑒別酵母菌的死細胞和活細胞。
三、試劑與器材
1.材料 釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡爾酵母(Saccharomyces calsbergensis)培養(yǎng)2天左右的麥芽汁(或豆芽汁)液體培養(yǎng)物。
2.試劑 0.05％和O.1％呂氏堿性美藍染色液、革蘭氏染色用的碘液。
3.器材 顯微鏡、載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、灑精燈等。
四、實驗內(nèi)容
1.美藍浸片觀察 酵母培養(yǎng)→制片→染色→鏡檢→30分鐘后再鏡檢
2.水-碘浸片觀察
五、關鍵步驟及注意事項
1.染液不宜過多或過少，否則，在蓋上蓋玻片時，菌液溢出或出現(xiàn)大量氣泡。
2.用鑷子取一塊蓋玻片，先將一側與菌液接觸，然后慢慢將蓋玻片放下，使其蓋在菌液上，蓋玻片不宜平著放下，避免氣泡產(chǎn)生。
六、思考題
1.呂氏堿性美藍染液濃度和作用時間的不同，對酵母菌死細胞數(shù)量有何影響?試分析其原因。
2.在顯微鏡下，酵母菌有哪些突出的特征區(qū)別于一般細菌?
實驗八 微生物直接計數(shù)法及測微技術
一、實驗目的
1.了解血球計數(shù)板計數(shù)原理，并掌握計數(shù)方法。
2.掌握用測微尺測定微生物大小的方法。
二、實驗原理
顯微鏡直接計數(shù)法是將一定稀釋的菌體或孢子懸液注入血球計數(shù)板的計數(shù)室中，于顯微鏡下直接計數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法。因為計數(shù)板是一塊特別的載玻片。其上由四條槽構成三個平臺；中間較寬的平臺又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺上各刻有一個方格網(wǎng)，每個方格網(wǎng)共分為九個大方格，一種是一個大方格分成25個中方格，而每個中方格又分成16個小方格(見圖2—3—44)；另一種是一個大方格分成16個中方格，每個中方格又分成25個小方格，無論哪種每個大方格中的小方格都是400個。每一個大方格邊長為0．1mm，所以計數(shù)室的容積為0．1mm3。計數(shù)時，通常只用5個中格內(nèi)的菌體(孢子)數(shù)即可。然后求出每個中方格的平均值，再乘上25或16，得出一個大方格中的總茵數(shù)，再換算成lml菌液中的總菌數(shù)。若設5個中方格中總菌數(shù)為N，菌液稀釋倍數(shù)為M，如果是25個中方格計數(shù)板，則計算方法為：
lml菌液中的總菌數(shù)=平均每個中格中菌的個數(shù)×25×104×M=50000N•M(個)
微生物細胞的大小是微生物基本的形態(tài)特征，也是分類鑒定的依據(jù)之一。微生物大小的測定，需要在顯微鏡下，借助于特殊的測量工具——測微尺，包括目鏡測微尺和鏡臺測微尺。鏡臺測微尺是中央部分刻有精確等分線的載玻片，一般是將1mm等分為100格，每格長0．01mm(即10pm)。鏡臺測微尺并不直接用來測量細胞的大小，而是用于校正目鏡測微尺每格的相對長度。
三、試劑與器材
1.材料 釀酒酵母、藤黃微球菌和大腸桿菌的染色標本片、釀酒酵母24h馬鈴薯斜面培養(yǎng)物。
2.實驗器材 細胞計數(shù)板、顯微鏡、蓋玻片、無菌毛細滴管、目鏡測微尺、鏡臺測微尺、載玻片、蓋玻片、顯微鏡等。
四、實驗內(nèi)容
1.微生物直接計數(shù)法 菌懸液制備→鏡檢計數(shù)室→加樣品→顯微鏡計數(shù)→清洗血細胞計數(shù)板
2.微生物測微技術 裝目鏡測微尺→校正→菌體大小測定
五、關鍵步驟及注意事項
1.防止加樣空氣泡產(chǎn)生。
2.調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強弱適當。
六、思考題
1.根據(jù)你的體會，說明用血細胞計數(shù)板計數(shù)的誤差主要來自哪些方面?應如何盡量減少誤差、力求準確?
2.某單位要求知道一種干酵母粉中的活菌存活率，請設計1～2種可行的檢測方法。
3.為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時，必須用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺進行校正?
實驗九 大腸桿菌生長曲線的測定
一、實驗目的
1.了解大腸桿菌的生長曲線特征和繁殖規(guī)律，并學會繪制生長曲線。
2.復習光電比濁法測量細菌數(shù)量的方法。
二、實驗原理
將一定量的細菌轉(zhuǎn)入新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)細胞要經(jīng)歷延遲期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個階段。以培養(yǎng)時間為橫坐標，以細菌數(shù)目的對數(shù)或生長速率為縱坐標作圖所繪制的曲線稱為該細菌的生長曲線。不同的細菌在相同的培養(yǎng)條件下其生長曲線不同，同樣的細菌在不同的培養(yǎng)條件下所繪制的生長曲線也不相同。
三、試劑與器材
1.材料與試劑 大腸桿菌、LB液體培養(yǎng)基70ml、分裝2支大試管(5ml／支)、剩余60ml裝入250ml的三角瓶。
2.器材 722型分光光度計、恒溫振蕩搖床、無菌試管、無菌吸管等。
四、實驗內(nèi)容
編號→接種→培養(yǎng)→比濁測定
五、關鍵步驟及注意事項
1.測定OD值時，要求從低濃度到高濃度測定
2.嚴格控制培養(yǎng)時間
六、思考題
1.根據(jù)實驗數(shù)據(jù)畫出生長曲線，并說明大腸桿菌生長特征。
2.如果用活菌計數(shù)法制作生長曲線，你認為會有什么不同?兩者各有什么缺點7．
3.次生禮謝產(chǎn)物的大量積累在哪個時期?根據(jù)細菌生長繁殖的規(guī)律，采用哪些措施可使次生代謝產(chǎn)物積累更多?
實驗十 水中細菌總數(shù)的測定
一、實驗目的
1.學習水樣的采取方法和水樣細菌總數(shù)測定的方法。
2.了解水源水的平板菌落計數(shù)的原理。
二、實驗原理
本實驗應用平板計數(shù)技術測定水中細菌總數(shù)。由于水中細菌種類繁多，它們對營養(yǎng)和其他生長條件的要求差別很大，不可能找到一種培養(yǎng)基在一種條件下，使水中所有的細菌均能生長繁殖，因此，以一定的培養(yǎng)基平板上生長出來的菌落，計算出來的水中細菌總數(shù)僅是一種近似值。目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基。
三、試劑與器材
1.試劑 牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，滅菌水
2.器材 滅菌三角瓶，滅菌的帶玻璃塞瓶，滅菌培養(yǎng)皿，滅菌吸管，滅菌試管等。
四、實驗內(nèi)容
1.水樣的采取
2.細菌總數(shù)測定
3.菌落計數(shù)方法
五、關鍵步驟及注意事項
1.注意全過程防止染菌
六、思考題
從自來水的細菌總數(shù)結果來看，是否合乎飲用水的標準？
實驗十一 細菌細胞的生化反應實驗
一、實驗目的
了解并掌握細菌鑒定中常用生理生化反應的原理和方法。
二、實驗原理
各種細菌由于具有不同的酶系統(tǒng)，致使它們能利用不同的底物，或雖然可以利用相同的底物，卻產(chǎn)生不同的代謝產(chǎn)物，因此可以利用各種生理生化反應來鑒別細菌。
糖發(fā)酵是最常用的生化反應，存在于大多數(shù)細菌中。不同的細菌在糖的分解能力上存在很大的差異。有些細菌能分解某種糖并產(chǎn)生酸性物質(zhì)(如乳酸、丙酸、醋酸等)和氣體(如二氧化碳、氫、甲烷等)，而有些細菌只產(chǎn)生酸不產(chǎn)生氣體。例如大腸桿菌分解乳糖和葡萄糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣，普通變形桿菌分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，但不能分解乳糖。酸的產(chǎn)生可利用指示劑來判斷。在培養(yǎng)基中加入溴甲酚紫(pH5．2為黃色，pH6．8為紫色)，當發(fā)酵產(chǎn)酸時，使培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色。氣體的產(chǎn)生可由發(fā)酵試管中倒置的德漢氏小管中有無氣泡的出現(xiàn)來驗證．
三、試劑與器材
1.材料大腸桿菌、普通變性桿菌、產(chǎn)氣桿菌、糖發(fā)酵培養(yǎng)基、蛋白胨水培養(yǎng)基、葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。
2.試劑甲基紅試劑、40％KOH、5％a一萘酚、乙醚、吲哚試劑。
3.實驗器材德漢氏小管、試管、接種環(huán)、恒溫培養(yǎng)箱。
四、實驗內(nèi)容
培養(yǎng)基配制→編號→試管→接種→培養(yǎng)→觀察結果
五、關鍵步驟及注意事項
1.要嚴格按照培養(yǎng)基配方配制培養(yǎng)基。
2.觀察結果時要注意滴加藥量及反應時間。
六、思考題
1.哪些生理生化試驗可用于區(qū)別大腸桿菌和產(chǎn)生腸桿菌?結果如何?
2.做糖發(fā)酵試驗時應注意哪些問題?
3.甲基紅試驗和伏一普試驗的最終產(chǎn)物如何?為什么會出現(xiàn)不同的最終產(chǎn)物?
實驗十二 噬菌體的分離、純化及效價測定
一、實驗目的
1.學習分離、純化噬菌體的原理和方法
2.觀察噬菌斑的形態(tài)和大小
3.掌握噬菌體效價測定的基本方法
二、實驗原理
噬菌體是細菌的專性寄生物，自然界中凡是有細菌存在的地方，均可以發(fā)現(xiàn)其特異性的噬菌體，噬菌體侵入細菌細胞后，利用宿主細胞的酶系統(tǒng)進行復制和增殖，最終導致細菌細胞裂解，噬菌體從細胞中釋放出來，可以進一步侵染細菌細胞。在液體培養(yǎng)基中，噬菌體可以使渾濁的菌懸液變?yōu)槌吻濉Ｔ陂L有宿主細菌的固體培養(yǎng)基平板上，噬菌體可以裂解細菌形成透明的空斑，即噬菌斑，一個噬菌體產(chǎn)生一個噬菌斑，因此可以利用這個性質(zhì)對噬菌體進行分離和效價的測定。
噬菌體的效價是指噬菌體的濃度，即一毫升培養(yǎng)液中所含有的噬菌體數(shù)量。噬菌體效價的測定方法多采用雙層瓊脂平板法。先在培養(yǎng)皿中倒入底層固體培養(yǎng)基，凝固后再倒入含有宿主細菌和一定稀釋度噬菌體的半固體培養(yǎng)基。培養(yǎng)一段時間后，計算噬菌斑的數(shù)量。
三、試劑與器材
1.材料大腸桿菌、牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨半固體培養(yǎng)基(含有瓊脂0．5％，試管分裝，每管3～5m1)、三倍濃縮的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基。
2.器材培養(yǎng)皿、無菌吸管、三角瓶、抽濾瓶、蔡氏細菌濾器、真空泵、陰溝污水。
四、實驗內(nèi)容
噬菌體分離→噬菌體純化→效價測定
五、關鍵步驟及注意事項
1.噬菌體時要注意細菌濾器的型號。
2.純化噬菌體時要注意形態(tài)、大小。
3.效價測定時要注意雙層瓊脂平板法的使用技巧。
六、思考題
1.在固體培養(yǎng)基平板上為什么能形成噬茵斑?
2.從固體培養(yǎng)基平板上得到的噬菌斑數(shù)目，如何計算噬菌體的效價？
沒用的東西貼那么多……太不敬業(yè)了
事實上，自然環(huán)境中的微生物有99%是不可以人工培養(yǎng)的，要獲得盡量多的空氣微生物的培養(yǎng)，就要盡量選擇豐富培養(yǎng)基，而不是人工培養(yǎng)基。肉湯培養(yǎng)基也可以。另外LB培養(yǎng)基，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基都可以的。
空氣中的微生物種類?以及針對不同種類的培養(yǎng)基
根據(jù)微生物的種類和實驗目的不同,培養(yǎng)基也有不同的種類和配制方法。 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養(yǎng)基,有時又稱為普通培養(yǎng)基。由于這種培養(yǎng)基中含有一般細胞生長繁殖所需要的最基本的營養(yǎng)物質(zhì),所以可供微生物生長繁殖之用。 干熱天菌、高壓蒸汽滅菌方法主要是通過升溫使蛋白質(zhì)變性從而達...
空氣中的微生物有哪些
1. 空氣中的微生物主要包括細菌、放線菌、真菌和藻類。2. 細菌是空氣中數(shù)量最多、種類最豐富的微生物之一，分布廣泛，來自土壤、動植物以及人類活動。3. 放線菌是一類原核生物，存在于土壤、空氣和水域中，對生態(tài)平衡起重要作用，同時產(chǎn)生生物活性物質(zhì)。4. 真菌如霉菌和酵母菌在自然界中負責分解有機...
空氣中主要含有哪些種類的微生物
1. 空氣中微生物的種類繁多，其中包括懸浮在塵埃上的多種球菌，涵蓋了包括八疊球菌屬在內(nèi)的一類好氧菌。2. 常見的還有形成孢子的好氧性桿菌，例如枯草芽孢桿菌。3. 空氣中亦存在野生酵母，如色串孢屬。4. 此外，霉菌的孢子，如青霉，也是空氣中的一部分。5. 甚至，在某些低等藻類中也可能存在微生...
空氣中微生物種類有哪些
1. 根據(jù)百度百科的信息，空氣中存在的微生物種類繁多，包括：細菌、病毒、真菌、放線菌、立克次體、支原體、衣原體以及螺旋體。
生物學。一般狀況下,空氣中都含有哪些微生物?
1. 空氣中含有多種微生物，包括植物的孢子、非常小的顆粒物質(zhì)，以及各類細菌和病毒。2. 病毒顆粒通常會引起呼吸道感染。盡管還有其他類型的病毒存在，但它們的周期較短，如果沒有找到宿主，很快就會解體。3. 病毒能夠在沒有宿主的情況下在空氣中存活，這是因為細菌具有細胞結構，能夠在空氣中存活較長時間...
微生物學實驗中如何培養(yǎng)空氣中的細菌?
觀察大小、形態(tài)各異的菌落，就可大致鑒別空氣個存在的微生物的種類。本實驗通過檢測普通實驗室和消毒后的無菌室空氣中存在的微生物，從而判斷無菌室的消毒效果，了解空氣中常見的微生物類群。（三)實驗器材 (1)培養(yǎng)基： 1)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。 2)馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基。 (2)器材：無菌平皿若干套...
空氣中主要微生物有哪些空氣中主要微生物有哪些
空氣中的微生物分布的種類和數(shù)量因環(huán)境不同有所差別.空氣中的微生物來源于人畜呼吸道的飛沫及地面飄揚起來的塵埃.由于空氣中缺乏營養(yǎng)物及適當?shù)臏囟?細菌不能繁殖,且常因陽光照射和干燥作用而被消滅.只有抵抗力較強的細菌和真菌或細菌芽胞才能存留較長時間.室外空氣中常見產(chǎn)芽胞桿菌、產(chǎn)色素細菌及真菌孢...
空氣中微生物的數(shù)量和種類與什么因素有關
空氣中主要含有哪些種類的微生物：主要有附著于塵埃上的從地面飛起的球菌屬(包括八疊球菌屬在內(nèi)的好氧菌);形成孢子的好氧性桿菌(如枯草芽孢桿菌);色串孢屬等野生酵母;青霉等霉菌的孢子等。在低等藻類中也似乎存在。用下列的方法可進行空氣滅菌:紫外線照射、消毒液噴灑，用不使細菌通過的小孔濾篩濾過...
微生物在空氣中如何分布
微生物廣泛存在于自然界中，種類繁多，繁殖速度快，適應環(huán)境能力強。它們在土壤、水中以及空氣中都有分布。土壤作為微生物的天然培養(yǎng)基，微生物的數(shù)量最多，主要以細菌為主，還包括放線菌、真菌、螺旋體和噬菌體等。土壤中的病原微生物通常會通過動物尸體、糞便、污染物質(zhì)及污水進入土壤，并能在土壤中...
生物學。一般狀況下,空氣中都含有哪些微生物?
能在空氣中存活的有植物的孢子，很小的顆粒，還有各類細菌以及各類病毒，這些病毒一般是可引起呼吸道感染的，其他的病毒也存在，但是周期很短，如果沒有寄主，會很快解體。而病毒離開寄主依然能夠存在，因為細菌是具有細胞結構的，所以空氣中的細菌種類繁多，進入人體會被鼻粘膜清理，這屬于人體免疫的一部分...
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