瓊脂糖凝膠電泳中dna的影響遷移速度有哪些 瓊脂糖凝膠電泳中dna分子遷移率受哪些因素的影響
瓊脂糖凝膠電泳中dna的影響遷移速度：
1、DNA的分子大小及構(gòu)型
不同構(gòu)型DNA的移動(dòng)速度次序?yàn)椋汗﹥r(jià)閉環(huán)DNA（covalently closed circular,cccDNA）>直線DNA>開環(huán)的雙鏈環(huán)狀DNA.線狀雙鏈DNA分子在一定濃度瓊脂糖凝膠中的遷移速率與DNA分子量對(duì)數(shù)成反比,分子越大則所受阻力越大,也越難于在凝膠孔隙中蠕行。
因而遷移得越慢.當(dāng)瓊脂糖濃度太高時(shí),環(huán)狀DNA（一般為球形）不能進(jìn)入膠中,相對(duì)遷移率為0（Rm=0）,而同等大小的直線雙鏈DNA（剛性棒狀）則可以長軸方向前進(jìn)（Rm>0）,由此可見,這三種構(gòu)型的相對(duì)遷移率主要取決于凝膠濃度.
2、瓊脂糖濃度
一個(gè)給定大小的線狀DNA分子,其遷移速度在不同濃度的瓊脂糖凝膠中各不相同.DNA電泳遷移率的對(duì)數(shù)與凝膠濃度成線性關(guān)系.凝膠濃度的選擇取決于 DNA分子的大小.分離小于0.5kb的DNA段所需膠濃度是1.2-1.5%,分離大于10kb的DNA分子所需膠濃度為0.3-0.7%,DNA段大小間于兩者之間則所需膠濃度為0.8-1.0%.
3、DNA分子的構(gòu)象
當(dāng)DNA分子處于不同構(gòu)象時(shí),它在電場中移動(dòng)距離不僅和分子量有關(guān),還和它本身構(gòu)象有關(guān).相同分子量的線狀、開環(huán)和超螺旋DNA在瓊脂糖凝膠中移動(dòng)速度是不一樣的,超螺旋DNA移動(dòng)最快,
而線狀雙鏈DNA移動(dòng)最慢.如在電泳鑒定質(zhì)粒純度時(shí)發(fā)現(xiàn)凝膠上有數(shù)條DNA帶難以確定是質(zhì)粒DNA不同構(gòu)象引起還是因?yàn)楹衅渌鸇NA引起時(shí),可從瓊脂糖凝膠上將DNA帶逐個(gè)回收,用同一種限制性內(nèi)切酶分別水解,然后電泳,如在凝膠上出現(xiàn)相同的DNA圖譜,則為同一種DNA.
4、電源電壓
瓊脂糖凝膠分離大分子DNA實(shí)驗(yàn)條件的研究結(jié)果表明,在低濃度、低電壓下,分離效果較好.在低電壓條件下,線性DNA分子的電泳遷移率與所用的電壓呈正比.
但是,在電場強(qiáng)度增加時(shí),不同分子量的DNA段的遷移率將以不同的幅度增長,片段越大,因場強(qiáng)升高引起的遷移率升高幅度也越大,因此電壓增加,瓊脂糖凝膠的有效分離范圍將縮小.要使大于2kb的DNA段的分辨率達(dá)到最大電場強(qiáng)度不宜高于5V/cm.
5、嵌入染料的存在
熒光染料溴化乙啶用于檢測瓊脂糖凝膠中的DNA,染料會(huì)嵌入到堆積的堿基對(duì)之間并拉長線狀和帶缺口的環(huán)狀DNA,使其剛性更強(qiáng),還會(huì)使線狀DNA遷移率降低15％.
6、離子強(qiáng)度影響
電泳緩沖液的組成及其離子強(qiáng)度影響DNA的電泳遷移率.在沒有離子存在時(shí)(如誤用蒸餾水配制凝膠),電導(dǎo)率最小,DNA幾乎不移動(dòng),在高離子強(qiáng)度的緩沖液中(如誤加10×電泳緩沖液),則電導(dǎo)很高并明顯產(chǎn)熱,嚴(yán)重時(shí)會(huì)引起凝膠熔化或DNA變性.對(duì)于天然的雙鏈DNA,常用的幾種電泳緩沖液有TAE[含EDTA (pH8.0)和Tris-乙酸],TBE(Tris-硼酸和EDTA),TPE(Tris-磷酸和EDTA),一般配制成濃縮母液,儲(chǔ)于室溫.
凝膠電泳遷移速率100bp什么意思
凝膠電泳遷移速率100bp的意思：遷移率與膠瓊脂糖的濃度是有關(guān)系的,還與DNA的性質(zhì)（單鏈還是雙鏈）有關(guān)。在0.7%、1%、1.4%、2%的瓊脂糖凝膠電泳中，溴酚藍(lán)的遷移率分別與1000bp、600bp、200bp、150bp的雙鏈線性DNA片段大致相同。溶液中帶電粒子在電場 (E)中向著與它相異電荷的電極移動(dòng)，它的...
DNA電泳實(shí)驗(yàn)DNA片段遷移速度
DNA片段遷移速度的影響因素 影響DNA片段遷移速度的因素有很多，包括電子密度、離子強(qiáng)度、電場強(qiáng)度、膠狀物質(zhì)的種類和性質(zhì)等等。其中，電場強(qiáng)度是一個(gè)非常重要的因素，電場強(qiáng)度越大，DNA分子移動(dòng)的速度也越快，但同時(shí)也會(huì)導(dǎo)致DNA分子的斷裂。DNA片段遷移速度與DNA片段大小的關(guān)系 在DNA電泳實(shí)驗(yàn)中，DNA片段的大小...
瓊脂糖凝膠電泳注意事項(xiàng)
六、DNA樣品中鹽濃度會(huì)影響DNA的遷移率，平行對(duì)照樣品應(yīng)使用同樣的緩沖條件以消除這種影響。七、DNA遷移率取決于瓊脂糖凝膠的濃度，遷移分子的形狀及大小。采用不同濃度的凝膠有可能分辨范圍廣泛的DNA分子，制備瓊脂糖凝膠可根據(jù)DNA分子的范圍來決定凝膠的濃度。小片段的DNA電泳應(yīng)采用聚丙烯酰胺凝膠電泳以提高...
用瓊脂糖凝膠電泳分析核酸(DNA、RNA)有哪些影響因素
有很多 1 核酸的分子量 一般分子量越大 電泳速率越低 2 核酸的構(gòu)象 比如說超螺旋的比線狀的快，線狀的比開環(huán)的快 3 膠濃度 膠濃度越高，電泳速率越低 4 電壓 電壓越高，電泳速率越快 5 核酸結(jié)合物質(zhì) 如核酸結(jié)合了EB，速率就會(huì)變慢 應(yīng)該就真么多了。。。
影響DNA凝膠電泳結(jié)果的因素有哪些
則泳動(dòng)速度慢、羥基等吸附溶液中的正離子.反之. 4,或其形狀越接近球形,而且在嚴(yán)重時(shí)會(huì)燒斷濾紙或熔化瓊脂糖凝膠支持物,有時(shí)僅需數(shù)分鐘,在電場中的泳動(dòng)速度就越快.高壓電泳常需要冷卻裝置.前者電場強(qiáng)度為2－10伏特\/、溶液的性質(zhì).反之則越慢,后者為70－200伏特\/.這種溶液層的泳動(dòng)現(xiàn)象稱為電滲,當(dāng)...
基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)技能——核酸電泳
首先，瓊脂糖凝膠電泳利用瓊脂糖作為支持介質(zhì)，其分辨率可通過調(diào)整濃度來優(yōu)化。DNA分子在凝膠中泳動(dòng)受電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)影響，熒光染料使其在紫外下可見。實(shí)驗(yàn)步驟包括準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)環(huán)境、制備凝膠、調(diào)整電壓和溫度、正確上樣DNA、進(jìn)行電泳以及觀察和分析結(jié)果。影響DNA遷移的因素包括分子大小、瓊脂糖濃度、DNA構(gòu)象...
瓊脂糖凝膠電泳檢測pcr產(chǎn)物的原理
瓊脂糖凝膠電泳是一種常用的PCR產(chǎn)物檢測技術(shù)，具有分辨率高、操作簡便、成本低廉等優(yōu)點(diǎn)。其原理是基于DNA分子在電場中的遷移速率與分子大小成反比的原理，即分子量越小的DNA分子遷移速度越快，分子量越大的DNA分子遷移速度越慢。因此，在瓊脂糖凝膠電泳中，PCR產(chǎn)物會(huì)根據(jù)其大小不同在凝膠中分離，從而實(shí)現(xiàn)...
瓊脂糖凝膠電泳的原理是什么?
瓊脂糖凝膠具有網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，物質(zhì)分子通過時(shí)會(huì)受到阻力，大分子物質(zhì)在涌動(dòng)時(shí)受到的阻力大，因此在凝膠電泳中，帶電顆粒的分離不僅取決于凈電荷的性質(zhì)和數(shù)量，而且還取決于分子大小，這就大大提高了分辨能力。DNA分子在高于其等電點(diǎn)的溶液中帶負(fù)電，在電場中向陽極移動(dòng)。在一定的電場強(qiáng)度下，DNA分子的遷移速...
一文讀懂瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)
蛋白質(zhì)分離時(shí)，瓊脂糖凝膠也可用于根據(jù)大小和電荷進(jìn)行分離，但其孔徑較大，因此聚丙烯酰胺凝膠更適用于小蛋白質(zhì)分子，提供更好的分辨率。瓊脂糖凝膠電泳原理涉及將瓊脂糖加熱融化后倒入模具，其百分比影響孔徑大小，從而影響分子大小和移動(dòng)速度。DNA在凝膠中通過紫外線照射下溴化乙錠（EtBr）的染色，實(shí)現(xiàn)可視化。
有哪些因素會(huì)影響到電泳圖譜上DNA條帶的位置?
影響的因素很多.主要的有：1、 DNA的分子大小:線狀雙鏈DNA分子在一定濃度瓊脂糖凝膠中的遷移速率與DNA分子量對(duì)數(shù)成反比,分子越大則所受阻力越大,遷移得越慢.2、 瓊脂糖濃度 一個(gè)給定大小的線狀DNA分子,其遷移速度在不同濃度的瓊脂糖凝膠中各不相同.分離小于0.5kb的DNA片段所需膠濃度是 1.2-1...
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崆峒區(qū)優(yōu)化： ______ DAN分子大小,DAN分子所帶電荷量,電壓大小等
崆峒區(qū)優(yōu)化： ______[答案] 質(zhì)粒DNA分子具有三種構(gòu)型:共價(jià)閉合環(huán)DNA(cccDNA,SC構(gòu)型)、開環(huán)DNA(OC構(gòu)型)和線性分子(L構(gòu)型).在細(xì)菌體內(nèi),質(zhì)粒DNA是以負(fù)超螺旋構(gòu)型存在的.在瓊脂糖凝膠電泳中不同構(gòu)型的的同一種質(zhì)粒DNA,盡管分子量相同,但具有不同的電泳遷移...
崆峒區(qū)優(yōu)化： ______ 變性梯度凝膠電泳:雙鏈DNA 分子在一般的聚丙烯酰胺凝膠電泳時(shí),其遷移行為決定于其分子大小和電荷.不同長度的DNA 片段能夠被區(qū)分開,但同樣長度的DNA 片段在膠中的遷移行為一樣,因此不能被區(qū)分.DGGE/TGGE 技術(shù)在一般的聚...
