如何使用ph梯度萃取法提取分離大黃中蒽醌類(lèi)化合物 如何使用ph梯度萃取法提取分離大黃中蒽醌類(lèi)化合物
大黃中具有瀉下作用的成分是幾種蒽醌衍生物，其中甙是主要的成分，因其瀉下作用常強(qiáng)于相應(yīng)的甙元，甙元主要包括大黃酚、大黃素、大黃酸、蘆薈大黃素和大黃素甲醚共五種蒽醌甙元。大黃的致瀉效力與其中的結(jié)合性大黃酸含量成正比。游離的蒽醌甙元幾無(wú)致瀉作用。具有較強(qiáng)的致瀉作用的蒽醌甙有以下幾種：大黃酚-1-葡萄糖甙、大黃素-6-葡萄糖甙、蘆薈大黃素-8-葡萄糖甙、大黃酸-8-葡萄糖甙、大黃素甲醚葡萄糖甙、還含有蒽醌衍生物的雙糖甙，如：大黃素雙葡萄糖甙、蘆薈大黃素雙葡萄糖甙、大黃酚雙葡萄糖甙以及番瀉甙A和B，番瀉甙C，番瀉甙的瀉下作用，較蒽醌甙為強(qiáng)，但含量遠(yuǎn)較后者為少。近年來(lái)，日本人西岡五夫從大黃中分離出四種新的大黃瀉下成分，稱(chēng)大黃酸甙A、B、C、D。除此外還含有大黃鞣酸及相關(guān)物質(zhì)。如：沒(méi)食子酸（一部分是游離的，一部分是結(jié)合成沒(méi)食子酰葡萄糖甙），兒茶精，此類(lèi)鞣質(zhì)及相關(guān)物質(zhì)有止瀉作用與蒽醌衍生物的甙類(lèi)之瀉下作用恰恰相反。
1、大黃酚（chrysopanol）
金黃色片狀結(jié)晶。Mp196℃（乙醇或苯），能升華，可溶于丙酮、醋酸、氯仿、甲醇、乙醇、熱苯，微溶于石油醚、乙醚，不溶于水，NaHCO3和Na2CO3水溶液，可溶于NaOH溶液。
2、大黃素（Emodin）
橙黃色針狀結(jié)晶，mp256～257℃（乙醇或冰醋酸）能升華，其溶解度：乙醚0.14%，苯0.041%, 氯仿0.0718%，幾不溶于水，易溶于乙醇，可溶于稀氨水，Na2CO3水溶液。大黃素具有抑制小鼠黑色瘤和小鼠乳腺瘤的作用。
3、蘆薈大黃素（Aloeemodin）
黃色針狀結(jié)晶，mp223～224℃（甲苯）能升華，可溶于乙醚、苯、熱乙醇、稀氨水、Na2CO3和NaOH水溶液。
4、大黃酸（Rhein）
黃色針狀結(jié)晶，mp321～322℃（升華）。不溶于水，能溶于吡啶、碳酸氫鈉水溶液，微溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚、石油醚。大黃酸對(duì)艾氏腹水癌有抑制作用。
5、大黃素甲醚（Physcion）
紅色針晶mp206℃（苯）能升華。溶解性能似大黃酚。
6、羥基蒽醌甙類(lèi)
①大黃素甲醚葡萄糖甙（Physcion monoglucoside）
黃色針晶mp235℃
②蘆薈大黃素葡萄糖甙（Aloe-emodin monoglucoside）
mp239℃
③大黃素葡萄糖甙（Emodin monoglucoside）
mp190～191℃淺黃色針晶
④大黃酸葡萄糖甙（Rhein monoglucoside）
mp266～270℃
⑤大黃酚葡萄糖甙（Chrysophanol monolucoside）
mp245～246℃
⑥大黃素-l-O-β-D-葡萄糖甙（1-0-β-D-glucopyranosyl emodin）
mp239～241℃
⑦蘆薈大黃素-W-O-β-D-葡萄糖甙（W-O-β-D- glucopyranosyl aloe-emodin）
mp187～189℃
⑧大黃酸甙A、B、C、D
大黃酸甙A：R=OH 大黃酸甙B：R=OH
大黃酸甙C：R=H 大黃酸甙D：R=H
本實(shí)驗(yàn)根據(jù)大黃中的蒽醌苷類(lèi)在酸性條件下加熱，可水解成游離羥基蒽醌和糖，而游離羥基蒽醌不溶于水，可溶于乙醚、氯仿等親脂性有機(jī)溶劑的性質(zhì)，從水解物中將游離羥基蒽醌提出，再利用游離羥基蒽醌的酸性不同，采用 pH梯度萃取法將其分離。也可利用游離蒽醌的極性不同，采用硅膠柱色譜方法進(jìn)行分離。
儀器、材料及試劑
儀器：500mL圓底燒瓶、燒杯、滴管、橡皮管、球形冷凝管（750px）層析缸、標(biāo)本瓶、索氏提取器一套、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽濾瓶、普通濾紙、薄層板、噴霧器、廣泛PH試紙。
材料及試劑： 大黃10～20g、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、硫酸、氨水、鹽酸、乙醚、石油醚、醋酸乙酯。
實(shí)驗(yàn)步驟
1.游離蒽醌的提取
稱(chēng)取大黃粗粉50g，加20%H2SO4水溶液150mL，在水浴上加熱3-4小時(shí)，放冷，抽濾，濾餅水洗至近中性，抽濾，于70℃干燥后，研碎，置索氏提取器中，加入乙醚150mL回流提取3-4小時(shí)，得到乙醚提取液。
乙醚提取液經(jīng)薄層層析檢查有大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素、大黃素甲醚和大黃酚。薄層板為硅膠—CNC粘合板，展開(kāi)劑為石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯（7：3）近水平或直立展開(kāi)，在可見(jiàn)光下，可看到四個(gè)斑點(diǎn)。其中Rf=0.9的黃色斑點(diǎn)為大黃酚和大黃素甲醚的混合物,在此條件下,不能分開(kāi),其余3個(gè)斑點(diǎn)依Rf值（由大到小）的順序是大黃素（橙色斑點(diǎn)）、蘆薈大黃素（黃色斑點(diǎn)）、大黃酸（黃色斑點(diǎn)）。
2.PH梯度萃取分離
（1）將乙醚提取液加入250mL分液漏斗中，以40mL 2.5%NaHCO3水溶液萃取三次，乙醚層經(jīng)薄層層析檢查（薄層層析條件司上），提示乙醚提取液提出大黃酸后，合并三次NaHCO3萃取液，用濃鹽酸酸化，可得大黃酸沉淀。（注意：加酸時(shí)應(yīng)緩慢加入，以防酸液溢出）
（2）經(jīng)2.5% NaHCO3水溶液萃取后的乙醚層，繼以2.5% NaHCO3水溶液萃取三次，每次40mL，用薄層層析法檢查乙醚層，結(jié)果說(shuō)明已提盡大黃素后，合并三次Na2CO3萃取液，并酸化，得大黃素沉淀。（酸化時(shí)注意操作同前）經(jīng)2.5% Na2CO3水溶液提取后的乙醚液，再以2.5% Na2CO3水溶液提取約四次，每次30mL，經(jīng)薄層檢查，指示提盡蘆薈大黃素，合并四次萃取液，酸化得蘆薈大黃素沉淀。（酸化時(shí)操作注意同前）
（3）經(jīng)2.5% Na2CO3水溶液萃取過(guò)后乙醚層以2.5% NaOH水溶液萃取至堿水層無(wú)色為止（約四次），每次50mL，合并NaOH萃取液，酸化得沉淀。過(guò)濾、水洗至洗出液呈中性。低溫干燥后溶于小體積石油醚中，作為柱層析的樣品溶液，用簿層層性析檢查樣品溶液有一個(gè)黃色斑點(diǎn)（為大黃酚和大黃素甲醚混合物的斑點(diǎn)），若改用下述紙層析條件可將兩者分開(kāi)。
紙層析條件：新華濾紙7×20（cm）
展開(kāi)劑：水飽和的石油醚（BP60～90℃）
展開(kāi)方式：上行法
顯色劑：4%NaOH乙醇溶液
3.用纖維素粉柱層析法分離大黃酚和大黃素甲醚。
（1）纖維素粉的制備：
將新華濾紙（或其邊角紙屑）剪成小片，稱(chēng)取15g，加入稀硝酸（每100mL水中加65～68%的硝酸5mL）300mL，加熱水解（約2小時(shí)），抽濾（G3號(hào)耐酸漏斗），濾餅用蒸餾水洗至中性，再加少量乙醇、乙醚依次各洗滌一次，待揮發(fā)掉殘存的乙醚后，低溫烘干，粉碎，過(guò)120目篩備用。
（2）裝柱：將纖維素粉約8g，用水泡和石油醚（BP60～90℃）按濕法裝柱。
（3）樣品上柱：將樣品溶液用移液管小心加入層析柱柱床頂端。
（4）洗脫：用水泡和石油醚（BP60～90℃）洗脫，分段收集，每份10mL，分別濃縮，經(jīng)紙層析檢查（紙層析條件同上），相同者合并，分別收集大黃酚和大黃素甲醚。大黃酚用醋酸乙酯重結(jié)晶后測(cè)熔點(diǎn)。
4.大黃酚的鑒定
（1）在薄層板上用點(diǎn)滴反應(yīng)檢查大黃酚對(duì)NaOH，MgAc2試液的反應(yīng)。
（2）測(cè)定大黃酚的紫外光譜。
（3）用溴化鉀壓片法，測(cè)定大黃酚的紅外光譜。
大黃素的提取過(guò)程中為什么會(huì)有沉淀產(chǎn)生?
1、同回流提取相比，該方法的優(yōu)點(diǎn)？2、還可選用哪些溶劑提取？3、若平底燒瓶中有水，將會(huì)有什么結(jié)果？4、為什么溫度控制在溶劑蒸氣至冷凝管第二個(gè)球處？（3）PH梯度萃取 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、學(xué)習(xí)PH梯度萃取的方法和原理 2、得到大黃素粗品 二、實(shí)驗(yàn)原理 依據(jù)大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃...
...蘆薈大黃素 大黃素甲醚等成分,設(shè)計(jì)合理的 提取 分...
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怎樣提取大黃中的大黃素?
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大黃素鑒定實(shí)驗(yàn)中,如何制備大黃素?
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大黃素的測(cè)定用什么方法比較好?
1、同回流提取相比，該方法的優(yōu)點(diǎn)？2、還可選用哪些溶劑提取？3、若平底燒瓶中有水，將會(huì)有什么結(jié)果？4、為什么溫度控制在溶劑蒸氣至冷凝管第二個(gè)球處？（3）PH梯度萃取 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、學(xué)習(xí)PH梯度萃取的方法和原理 2、得到大黃素粗品 二、實(shí)驗(yàn)原理 依據(jù)大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃...
ph梯度萃取可用于哪些成分
適用于：三類(lèi)化合物做初步分離：蒽醌（例如：大黃）、黃酮（例如：槐角）和生物堿（例如：苦參）。當(dāng)然，具體的pH梯度和萃取使用的溶劑需要選擇一下。ph梯度萃取法是分離酸性、堿性、兩性成分常用的手段。ph變化改變了它們的存在狀態(tài)（游離型或解離型），從而改變了它們?cè)谌軇┫到y(tǒng)中的分配系數(shù)。大體上有...
梯度pH萃取法適用于哪些中藥化學(xué)成分的分離
適用于：三類(lèi)化合物做初步分離：蒽醌、黃酮（槐角）和生物堿（例如：苦參）。當(dāng)然，具體的pH梯度和萃取使用的溶劑需要選擇一下。液-液萃取技術(shù)利用樣品中不同組分分配在兩種不混溶的溶劑中溶解度或分配比的不同來(lái)達(dá)到分離、提取或純化的目的。Nemat分配定律指出：物質(zhì)將分配在兩種不混溶的液相中。如果以...
...蘆薈大黃素 大黃素甲醚等成分,設(shè)計(jì)合理的 提取 分...
大黃中大黃素的提取、分離和鑒定(1)酸水解一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、 學(xué)習(xí)酸水解的方法2、 得到大黃粉酸水解藥渣二、實(shí)驗(yàn)原理大黃中蒽醌類(lèi)化合物有結(jié)合態(tài)和游離態(tài)兩種形式存在,為得到游離蒽醌類(lèi)化合物,先酸水解,使蒽醌類(lèi)化合物以苷元的形式游離出來(lái)。三、方法 10g大黃粉 20%H2SO4直火回流加熱1小時(shí),抽濾濾渣 水洗中性...
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天峨縣滾動(dòng)： ______[答案] 較常用的分離方法有:\x0d(一)柱層析法\x0d分離黃酮類(lèi)化合物常用的吸附劑或載體有硅膠、聚酰胺及纖維素粉等.此外,也有用氧化鋁、氧化鎂及硅藻土等.\x0d1.硅膠柱層析:\x0d此法應(yīng)用范圍最廣,主要適于分離異黃酮、二氫黃酮、二氫黃酮醇...
天峨縣滾動(dòng)： ______ 這個(gè)不好下定論,因?yàn)檫@個(gè)必須要看特定生物堿的特性,以便從一樓網(wǎng)友所說(shuō)的幾種方案里選擇,并且還可以選擇CO2超臨界萃取法等,能選擇性的提取生物堿,如從煙葉中提取尼古丁、從咖啡豆中部分提取咖啡因…… 不過(guò)你對(duì)這些完全是外...
天峨縣滾動(dòng)： ______ 離. 二 分離方法: 1 蒽醌苷類(lèi)和游離蒽醌衍生物的分離:用分步提取法(如前述) 2 游離蒽醌衍生物的分離:可選用分步結(jié)晶法、梯度pH萃取法或?qū)游龇ㄟM(jìn)行. 梯度pH萃取法是分離游離蒽醌衍生物的經(jīng)典方法: 1.局限性 2.原理 性質(zhì)相似,酸...
