大分子WB很難？手把手教學(xué)來啦！
大分子WB檢測難點在于大分子蛋白質(zhì)的完整性容易受到破壞。為了保護大分子蛋白質(zhì)的完整性，我們首先考慮的是凝膠體系和蛋白樣品的制備。
在凝膠體系的選擇上，我們采用了Tris-Acetate凝膠體系，與傳統(tǒng)的Laemmli凝膠體系相比，Tris-Acetate凝膠體系的中性pH值（7.0）在最大程度上保持了大分子蛋白質(zhì)的完整性。通過實驗對比，我們可以清楚地看到，在Tris-Acetate凝膠中，150KDa以上的條帶清晰、銳利，而Laemmli凝膠中的條帶則較為模糊。
在蛋白樣品制備階段，選擇合適的裂解液至關(guān)重要。我們推薦使用裂解能力溫和的裂解液，如RIPA裂解液、RIPA裂解液（弱）、Co-IP裂解液或更溫和的CHAPS裂解液。同時，使用LDS-PAGE蛋白上樣緩沖液替代SDS，有利于維持蛋白質(zhì)的完整性。最后，70℃水浴代替100℃煮樣，可以有效地避免蛋白質(zhì)ASP-Pro鍵的斷裂。
在樣品制備上，我們提供了詳細的流程。首先，根據(jù)下圖配制CHAPS裂解液和LDS-PAGE蛋白上樣緩沖液（4X）。然后，根據(jù)不同類型的細胞樣品（貼壁細胞、懸浮細胞、動物組織）進行裂解處理，確保充分裂解。接著，離心收集裂解液，檢測蛋白濃度，使用BCA蛋白濃度檢測試劑盒進行分裝，并在-80℃冰箱中保存。
大分子WB檢測方案分為樣品制備、制梯度膠、跑膠、轉(zhuǎn)膜和免疫印跡五個階段。樣品制備中，我們詳細介紹了細胞和動物組織樣品的處理方法。制梯度膠時，我們采用3%的低濃度Tris-Acetate膠，然后通過梯度膠灌膠器灌制梯度膠，最終在冰水浴中電泳。
跑膠階段，我們配制了1X Running buffer，并在冰水浴中使用130v電壓進行電泳。對于需要檢測200KDa以上的大分子蛋白質(zhì)，我們可以延長電泳時間，以確保其充分分離。轉(zhuǎn)膜時，我們采用20V恒壓進行濕法轉(zhuǎn)移，以確保轉(zhuǎn)移效率。
最后，在轉(zhuǎn)移完成后，將膜取出并使用封閉液封閉1小時，即可用于免疫印跡實驗。整個過程與常規(guī)Laemmli凝膠體系步驟相似。
通過這套大分子WB檢測方案，我們相信大分子WB檢測將不再成為您的困擾。希望這篇指南能幫助您在實驗中取得成功。祝您科研順利！
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從零開始,手把手教你WB實驗全過程
顯影曝光：使用ECL發(fā)光液，將PVDF膜放入暗盒中孵育5min，然后置于儀器中曝光拍照。結(jié)果展示：參照相關(guān)文獻，展示W(wǎng)B實驗結(jié)果。通過以上步驟，你將能從零開始，掌握WB實驗的全過程，產(chǎn)出美觀、結(jié)果準確的實驗圖。
手把手教學(xué)——WB條帶量化之ImageJ軟件分析
首先，打開ImageJ，通過File→Open功能導(dǎo)入條帶圖像（或者直接拖拽至軟件）。接著，將圖像轉(zhuǎn)換為8位灰度圖像，以便后續(xù)處理（Image→Type→8-bit）。對于方法一，選擇矩形工具框選所有條帶，但排除標記條帶，然后進行Gel分析，生成峰圖和閉合峰的直線，最后使用魔棒工具測量每個峰的面積，得到量化值。方法...
手把手教學(xué)——WB條帶量化之ImageJ軟件分析
方法一：啟動ImageJ，打開條帶圖片（File > Open或拖拽）將圖片轉(zhuǎn)為灰度（Image > Type > 8-bit）選擇矩形工具框選條帶，執(zhí)行Analyze > Gels相關(guān)步驟，得到峰圖并閉合峰口使用魔棒工具測量峰面積，得到量化值方法二：同上，打開和轉(zhuǎn)為灰度圖片去除背景（Process > Subtract Background）設(shè)置測量參數(shù)（An...
AI 怎么快速的做出復(fù)雜的幾何圖形效果?
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手把手教學(xué)之屋頂防水補漏怎么做
屋頂防水補漏怎么做——清理屋頂表面首先，在屋頂防水之前，應(yīng)首先清潔屋頂表面的灰塵和碎屑。然后開始防水屋頂處理。一旦這些基本工作完成，開始刷第一層處理劑，第一刷的面積不應(yīng)太大，但也要確保涂刷區(qū)的大小可以滿足建設(shè)當天的需要。接下來，在找平層期間準備水泥砂漿，根據(jù)設(shè)計要求懸掛線，然后畫出標準...
殘疾人學(xué)5筆,好心人幫忙,叩謝!
第三：我希望孩子不是那種脾氣不好的孩子，如果那樣的話，教她學(xué)這些東西，會很辛苦的，對一個籠啞人來說，內(nèi)心世界是最平靜的，我們要抓住最有力的條件幫助她，那就是---“眼睛與手”，她應(yīng)該知道漢字的意思吧，那我們就用文字語言的方式教育她。第四：你想讓她學(xué)Photoshop，我不建議學(xué)這個，...
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